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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T南非諾卡菌PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63346 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
空泡相關(guān)蛋白A(VacA)ELISA試劑盒 VacA ELISA Kit 核糖體合成蛋白BOP1抗體英文名稱:BOP1 0.2ml
空腸彎曲菌黏附蛋白(PEB1)ELISA試劑盒 PEB1 ELISA Kit 調(diào)節(jié)中心體分離早期相關(guān)激酶BORA抗體英文名稱:BORA 0.1ml
克雷白氏桿菌(klebsiella)ELISA試劑盒 klebsiella ELISA Kit 萊姆病螺旋體抗體英文名稱:Borrelia burgdorferi 0.2ml
克拉拉細(xì)胞蛋白(CC16)ELISA試劑盒 CC16 ELISA Kit 成熟相關(guān)蛋白BOULE抗體英文名稱:BOULE 0.2ml
可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)ELISA試劑盒 sTfR ELISA Kit 伸長因子結(jié)合蛋白抗體英文名稱:BPOZ 0.2ml
可溶性腫瘤壞死因子樣細(xì)胞凋亡弱誘導(dǎo)因(sTweak)ELISA試劑盒 sTweak ELISA Kit 睪特異性堿性蛋白Y2抗體英文名稱:BPY2 0.2ml
可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)ELISA試劑盒 sTRAIL ELISA Kit 癌易感基因2相關(guān)蛋白抗體英文名稱:BRAF35 0.2ml
可溶性腫瘤壞死因子受體2(sTNF-R2)ELISA試劑盒 sTNF-R2 ELISA Kit 磷酸化癌易感基因1抗體英文名稱:Phospho-BRCA1(Ser1280) 0.1ml
可溶性腫瘤壞死因子α受體(sTNFαR)ELISA試劑盒 sTNFαR ELISA Kit 磷酸化癌易感基因1抗體英文名稱:Phospho-BRCA1 (Ser1387) 0.1ml
可溶性粘附分子(Sam)ELISA試劑盒 Sam ELISA Kit 磷酸化上皮鈣粘附分子抗體英文名稱:Phospho-E Cadherin (Ser838 + Ser840) 0.1ml
可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sPECAM-1/sCD31)ELISA試劑盒 sPECAM-1/sCD31 ELISA Kit 磷酸化癌易感基因1抗體英文名稱:Phospho-BRCA1 (Ser1466) 0.1ml
可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)ELISA試劑盒 SFMC ELISA Kit BRD2蛋白抗體英文名稱:BRD2 0.2ml
可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1(sVCAM-1)ELISA試劑盒 sVCAM-1 ELISA Kit BRD3蛋白抗體英文名稱:BRD3 0.2ml
可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)ELISA試劑盒 VEGFR-2/sFLK-1 ELISA Kit 磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗體英文名稱:Phospho-BTK (Tyr551) 0.1ml
可溶性血管內(nèi)皮細(xì)胞蛋白C受體(sEPCR)ELISA試劑盒 sEPCR ELISA Kit 磷酸化酪氨酸蛋白激酶6/激酶抗體英文名稱:phospho-Brk (Tyr447) 0.1ml
50T南非諾卡菌PCR檢測試劑盒黃芽黃素 Tectochrysin 520-28-5 10mg
卡瓦黃素內(nèi)酯B Flavokawain B 1775-97-9 10mg
七葉膽苷XVII Gypenoside XVII 80321-69-3 10Mg
黃花倒水蓮皂苷A fallaxsaponinA 5mg
款冬巴耳二醇 bauer-7-ene-3β, 16α-diol 5mg
葛根素芹菜糖苷 Puerarin apioside 103654-50-8 10mg
葛根素-6″-O-木糖苷 Puerarin 6"-O-xyloside 114240-18-5 10mg
劍葉龍血素A cochinchinenin A 20mg
二酚 cannabidiol 13956-29-1 5mg
醉魚草皂苷IVb Buddlejasaponin IVb 152580-79-5 20mg
升麻醇-3-O-β-D-吡喃木糖苷 Cimigenol3-O-β-D -xylpyranoside 27994-11-2 10mg
木犀草素-7-葡萄糖醛酸苷 Luteolin-7-glucuronide 29741-10-4 10mg
益母草苷 Ajugol 52949-83-4 20mg