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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽(yáng)性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針?lè)晒舛?RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T大腸桿菌stx2基因PCR檢測(cè)試劑盒 |
50T |
BH-P63476 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽(yáng)性對(duì)照,只提供沒(méi)有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽(yáng)性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽(yáng)性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽(yáng)性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽(yáng)性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見(jiàn)下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽(yáng)性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
Alpha-D 生育酚/維生素E(Alpha-D TPL)ELISA試劑盒 Alpha-D TPL ELISA Kit CD163蛋白樣1抗體英文名稱:CD163L1 0.1ml
Agouti相關(guān)蛋白(AGRP)ELISA試劑盒 AGRP ELISA Kit 周期素依賴性激酶5調(diào)節(jié)蛋白1樣蛋白1抗體英文名稱:CDKAL1 0.2ml
AFG3樣蛋白2(AFG3L2)ELISA試劑盒 AFG3L2 ELISA Kit 22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框31抗體英文名稱:C22orf31 0.2ml
Adropin(ENHO)ELISA試劑盒 ENHO ELISA Kit 細(xì)胞分裂周期37樣蛋白1抗體英文名稱:CDC37L1 0.2ml
ADP-核糖基化因子5(ARF5)ELISA試劑盒 ARF5 ELISA Kit 羧肽酶X(M14家族1)抗體英文名稱:CPXM 0.2ml
ADP-核糖基化因子4(ARF4)ELISA試劑盒 ARF4 ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白135抗體英文名稱:CCDC135 0.2ml
ADAM金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA試劑盒 ADAMTS4 ELISA Kit 跨膜結(jié)構(gòu)域邊緣蛋白CEE抗體英文名稱:CEE 0.2ml
Ⅳ型前膠原肽(PⅣNP)ELISA試劑盒 PⅣNP ELISA Kit 分子伴侶CESK1蛋白抗體英文名稱:CESK1 0.2ml
Ⅳ型前膠原氨基末端肽(PⅣNP)ELISA試劑盒 PⅣNP ELISA Kit 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白124抗體英文名稱:CCDC124 0.2ml
Ⅳ型膠原(Col Ⅳ)ELISA試劑盒 Col Ⅳ ELISA Kit CDK5激活結(jié)合蛋白1抗體英文名稱:CDK5RAP1 0.2ml
Ⅳ型膠原(Ⅳ-C)ELISA試劑盒 Ⅳ-C ELISA Kit 磷酸化細(xì)胞表面趨化因子受體4相關(guān)蛋白2抗體英文名稱:phospho-CNOT2(Ser101) 0.2ml
Ⅲ型前膠原肽(PⅢP)ELISA試劑盒 PⅢP ELISA Kit /睪抗原1B/1A英文名稱:testis antigen 1B 0.2ml
Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)ELISA試劑盒 PⅢNP ELISA Kit 磷酸化細(xì)胞分裂周期蛋白25B抗體英文名稱:phospho-Cdc25B (Ser149) 0.1ml
Ⅲ型前膠原氨基端肽(PⅢNT)ELISA試劑盒 PⅢNT ELISA Kit 球蛋白超家族成員16抗體英文名稱:IGSF16 0.2ml
Ⅲ型前膠原氨基末端肽(PⅢNP)ELISA試劑盒 PⅢNP ELISA Kit 跨膜蛋白12抗體英文名稱:TMEM12 0.2ml
50T大腸桿菌stx2基因PCR檢測(cè)試劑盒50次 雙酶一管式RT-PCR試劑盒(MMLV-Taq) Two-Enzyme One-Tube RT-PCR Kit -20℃保存
1mL 一步式RT-PCR Mix One-Step RT-PCR Mix -20℃保存
100次 免RNA提取RT-PCR試劑盒 Cell Lysate RT-PCR Mix -20℃保存
50次 即用型熒光定量RT-PCR試劑盒 Instant Realtime RT-PCR Kit -20℃保存
300次 即用型熒光定量RT-PCR試劑盒 Instant Realtime RT-PCR Kit -20℃保存
30次 通用型全基因組擴(kuò)增試劑盒 Universal WGA Kit -20℃保存
30次 單細(xì)胞全基因組擴(kuò)增試劑盒 Single Cell WGA Kit -20℃保存
30次 石蠟包埋組織全基因組擴(kuò)增試劑盒 FFPE WGA Kit -20℃保存
30次 單孢子全基因組擴(kuò)增試劑盒 Single Spore WGA Kit -20℃保存
30次 環(huán)狀DNA全基因組擴(kuò)增試劑盒 Circular DNA WGA Kit -20℃保存
50次 通用型LAMP試劑盒 Universal LAMP Amplification Kit -20℃保存
50次 通用型RT-LAMP試劑盒 Universal RT-LAMP Kit -20℃保存
50次 LAMP擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照 LAMP Positive Control -20℃保存