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注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T查帕雷病毒PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63524 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
組蛋白脫乙?;?/span>8(HDAC8)ELISA試劑盒 HDAC8 ELISA Kit 7號(hào)染色體開放閱讀框25抗體英文名稱:C7orf25 0.2ml
組蛋白脫乙?;?/span>7(HDAC7)ELISA試劑盒 HDAC7 ELISA Kit COG1蛋白抗體英文名稱:COG1 0.1ml
組蛋白脫乙?;?/span>6(HDAC6)ELISA試劑盒 HDAC6 ELISA Kit 過敏C3受體/補(bǔ)體C3受體抗體英文名稱:C3a Receptor/C3aR 0.1ml
組蛋白脫乙?;?/span>5(HDAC5)ELISA試劑盒 HDAC5 ELISA Kit CD3抗體英文名稱:CD3 0.1ml
組蛋白脫乙?;?/span>4(HDAC4)ELISA試劑盒 HDAC4 ELISA Kit CP2相關(guān)轉(zhuǎn)錄抑制因子1抗體英文名稱:CRTR1 0.1ml
組蛋白脫乙?;?/span>3(HDAC3)ELISA試劑盒 HDAC3 ELISA Kit 電壓依賴型N型鈣通道α1B抗體英文名稱:CACNA1B (N type) 0.2ml
組蛋白脫乙酰基酶2(HDAC2)ELISA試劑盒 HDAC2 ELISA Kit 煙堿型乙酰膽堿受體A2(神經(jīng)型)抗體英文名稱:CHRNA2(neuronal) 0.1ml
組蛋白脫乙?;?/span>11(HDAC11)ELISA試劑盒 HDAC11 ELISA Kit C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族1成員A抗體英文名稱:CLEC1/CLEC1A 0.2ml
組蛋白脫乙?;?/span>10(HDAC10)ELISA試劑盒 HDAC10 ELISA Kit γ干擾素誘導(dǎo)單核細(xì)胞因子抗體英文名稱:CXCL9/MIG 0.1ml
組蛋白脫乙?;?/span>1(HDAC1)ELISA試劑盒 HDAC1 ELISA Kit 血小板因子4抗體英文名稱:CXCL4/PF4 0.1ml
組蛋白H4(H4)ELISA試劑盒 H4 ELISA Kit 血小板趨化因子7蛋白抗體英文名稱:CXCL7/NAP-2/PPBP 0.1ml
組蛋白H3(H3)ELISA試劑盒 H3 ELISA Kit 干擾素誘導(dǎo)T細(xì)胞趨化因子抗體英文名稱:CXCL11 0.2ml
組蛋白H2B(H2B)ELISA試劑盒 H2B ELISA Kit B-細(xì)胞趨化因子抗體英文名稱:CXCL13/BCA1 0.1ml
組蛋白H1(H1)ELISA試劑盒 H1 ELISA Kit 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白14抗體英文名稱:CARD14 0.2ml
組蛋白H2A(H2A)ELISA試劑盒 H2A ELISA Kit 凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白12抗體英文名稱:CARD12 0.1ml
50T查帕雷病毒PCR檢測試劑盒1mL C溶液,5mg/mL Mitomycin Solution 4℃避光保存
1g 硫酸新霉素干粉 Neomycin Sulfate Powder 4℃保存
5mL 新生霉素溶液,50mg/mL Novobiocin Sodium Solution -20℃避光保存
10mL 制霉菌素溶液,2mg/mL Nystatin Solution -20℃避光保存
10mL 土霉素鹽酸鹽溶液,100mg/mL Oxytetracycline HCl Solution -20 ℃避光保存
1Mu 青霉素G鉀鹽溶液,200mg/mL Penicillin G Potassium 室溫保存,溶液需-20℃保存
10mL 青霉素G鈉鹽溶液 Penicillin G Sodium Solution -20 ℃避光保存
5mL 多粘菌素 B 硫酸鹽 Polymyxin B Sulfate Solution 4℃避光保存
25mg 嘌呤霉素干粉 Puromycin Powder 4℃保存
10mL 利福平溶液,100mg/mL Rifampicin Solution 4℃保存
10mL 壯觀霉素溶液,50mg/mL Spectinomycin Solution 4℃避光干燥保存
10mL 鏈脲佐菌素溶液,10mg/mL Streptozotocin Solution -20℃保存
10mL 硫酸鏈霉素溶液,50mg/mL Streptomycin Sulfate Solution 4℃避光保存