咨詢電話:18117197628
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T乙型腦炎病毒PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63626 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC 管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
細(xì)胞附著蛋白3(CYTH3)ELISA試劑盒 CYTH3 ELISA Kit 減數(shù)分裂同源蛋白DMC1抗體英文名稱:DMC1 0.2ml
細(xì)胞附著蛋白2(CYTH2)ELISA試劑盒 CYTH2 ELISA Kit DNA連接酶3抗體英文名稱:DNA Ligase III 0.2ml
細(xì)胞附著蛋白1(CYTH1)ELISA試劑盒 CYTH1 ELISA Kit 磷酸化DNA依賴性蛋白激酶抗體英文名稱:phospho-DNA PKcs (Thr2638) 0.1ml
細(xì)胞分裂周期因子25(CDC25)ELISA試劑盒 CDC25 ELISA Kit 磷酸化DNA依賴性蛋白激酶抗體英文名稱:phospho-DNA PKcs (Thr2647) 0.1ml
細(xì)胞分裂周期因子23(CDC23)ELISA試劑盒 CDC23 ELISA Kit DNA聚合酶δ2/DNA pol δ 2抗體英文名稱:DNA polymerase delta p50 0.2ml
細(xì)胞毒性T-細(xì)胞關(guān)聯(lián)抗原4(CTLA4)ELISA試劑盒 CTLA4 ELISA Kit DNA聚合酶δ催化亞單位/DNA pol δ cat抗體英文名稱:DNA Polymerase delta, catalytic subunit 0.2ml
細(xì)胞程序性死亡蛋白6相互作用蛋白(PDCD6IP)ELISA試劑盒 PDCD6IP ELISA Kit DNA聚合酶η抗體英文名稱:DNA polymerase eta 0.2ml
細(xì)胞程序性死亡蛋白6(PDCD6)ELISA試劑盒 PDCD6 ELISA Kit DNA聚合酶γ/DNA pol γ抗體英文名稱:DNA Polymerase gamma 0.2ml
細(xì)胞程序性死亡蛋白5(PDCD5)ELISA試劑盒 PDCD5 ELISA Kit DNA聚合酶ι/DNA pol ι抗體英文名稱:DNA Polymerase iota 0.2ml
細(xì)胞程序性死亡蛋白1配體2(PDCD1LG2)ELISA試劑盒 PDCD1LG2 ELISA Kit DNA聚合酶κ/DNA pol κ抗體英文名稱:DNA Polymerase Kappa/POLK 0.2ml
細(xì)胞程序性死亡蛋白1配體1(PDCD1LG1)ELISA試劑盒 PDCD1LG1 ELISA Kit DNA聚合酶λ/DNA pol λ抗體英文名稱:DNA Polymerase lambda 0.2ml
細(xì)胞程序性死亡蛋白1(PDCD1)ELISA試劑盒 PDCD1 ELISA Kit DNA聚合酶μ/DNA pol μ抗體英文名稱:DNA polymerase mu 0.2ml
錫蛋白(SNN)ELISA試劑盒 SNN ELISA Kit 細(xì)胞周期蛋白3抗體英文名稱:DNAJA2 0.2ml
烯醇化酶4(ENO4)ELISA試劑盒 ENO4 ELISA Kit DNA甲基轉(zhuǎn)移酶2抗體英文名稱:Dnmt2 0.2ml
烯醇化酶磷酸酶1(ENOPH1)ELISA試劑盒 ENOPH1 ELISA Kit DNAJC9蛋白抗體英文名稱:DNAJC9 0.2ml
50T乙型腦炎病毒PCR檢測試劑盒10mL ONPG溶液,10mg/mL O-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside -20℃干燥避光保存
300次 β-半乳糖苷酶檢測試劑盒 β-galactosidase Assay Kit -20℃或-80℃避光保存
200次 ADP/ATP發(fā)光法細(xì)胞活力檢測試劑盒 ADP/ATP Luminescent Cell Viability Assay Kit -20℃或-80℃避光保存
200次 ATP發(fā)光法細(xì)胞活力檢測試劑盒 ATP Luminescent Cell Viability Assay Kit -20℃或-80℃避光保存
200次 ATP檢測試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
50 T ATP酶測試盒(組織及細(xì)胞膜不需高速離心) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
50 T ATP酶測試盒(組織及細(xì)胞膜需高速離心) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
200 mg Catalase(抗氧化酶) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
100次 CuZn/Mn-SOD活性檢測試劑盒(WST法) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
50 T GSH—PX測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
100 T GSH—ST測試盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
共100次 GSH和GSSG試劑盒 Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
50 T GSH試劑盒(谷胱甘肽測試盒)(比色法) Oxidative Stress Detection Kit 常溫保存
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。