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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T豬源性成分(Porcine)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P64088 |
實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
ras癌基因家族Rab8蛋白/原癌基因c MEL抗體英文名稱:RAB8 0.1ml
ras癌基因家族Rab2抗體英文名稱:RAB2 0.2ml
ras癌基因家族Rab3a抗體英文名稱:RAB3A 0.1ml
ras癌基因家族Rab9蛋白抗體英文名稱:RAB9 0.1ml
ras癌基因家族RAB20抗體英文名稱:RAB20 0.2ml
Ras樣蛋白A+B抗體英文名稱:RALA+RALB 0.2ml
Rad51抗體英文名稱:Rad51 0.1ml
RNA結(jié)合蛋白片段Y染色體家族蛋白2抗體英文名稱:RBMY1F 0.2ml
RNA結(jié)合蛋白片段Y染色體家族蛋白1抗體英文名稱:RBMY1A1 0.2ml
RNA聚合酶III抗體英文名稱:RNA polymerase III 0.2ml
磷酸化原癌基因c-Met相關(guān)酪氨酸激酶抗體英文名稱:phospho-Ron (Tyr1238+Tyr1239) 0.1ml
磷酸化急性髓細(xì)胞白血病1蛋白抗體英文名稱:phospho-RUNX1(Ser303) 0.2ml
DNA修復(fù)蛋白Rad23抗體英文名稱:Rad23 0.2ml
核糖核苷酸還原酶1抗體英文名稱:RRM1 0.1ml
組織相容性復(fù)合物RTF1抗體英文名稱:RTF1 0.2ml
50T豬源性成分(Porcine)PCR檢測試劑盒含225ml 緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋 Buffered Peptone Water 10個/包
含900ml緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋 Buffered Peptone Water 900ml/袋*2
含90ml 緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋 Buffered Peptone Water 90ml/袋*10
含100ml 緩沖蛋白胨水(BPW)均質(zhì)袋 Buffered Peptone Water 90ml/袋*10
含225ml 3%氯化鈉堿性蛋白胨水均質(zhì)袋 3% NaCl Alkaline Peptone Water 10個/包
含225ml mEC+n肉湯均質(zhì)袋 mEC+n Broth 10個/包
新生霉素 Novobiocin 4.5mg/支*5
含225ml LB1肉湯均質(zhì)袋 LB1 Broth 10個/包
萘啶酮酸(5.0mg) Nalidixic Acid 5.0mg/支*5
吖啶黃素(3.0mg) Acridine Flavin 3.0mg/支*5
含225ml FB1增液均質(zhì)袋 FB1 Broth 10個/包
FB1(Half-Fraser)添加劑(A、B) FB1 additive(A、B) 2ml/支*40
含225mlGN增液均質(zhì)袋 GN Enrichment Broth 10個/包