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服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T轉(zhuǎn)基因植物NPTII基因PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P64120 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
固醇攜帶蛋白2抗體英文名稱:SCP2 0.2ml
信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5抗體英文名稱:SOCS5 0.1ml
碳酸氫鈉協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4-A4抗體英文名稱:SLC4A4 0.1ml
SHISA蛋白家族9抗體英文名稱:SHISA9 0.2ml
細(xì)胞凋亡抑制因子抗體英文名稱:Survivin 0.2ml
外紡錘體極樣蛋白1抗體英文名稱:Separase 0.1ml
磷酸化信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子5a抗體英文名稱:phospho-STAT5a(Tyr694) 0.1ml
抗冠狀病毒表面S蛋白抗體英文名稱:SARS S-protein 0.1ml
突觸素抗體/突觸相關(guān)蛋白-1英文名稱:SYAP1 0.1ml
素抗體英文名稱:Secretin 0.1ml
可溶性載質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白22A17抗體英文名稱:Slc22A17 0.1ml
磷酸化Src原癌基因抗體英文名稱:phospho-Src(Tyr529) 0.1ml
SH2結(jié)構(gòu)含磷酸肌醇SHIP1抗體英文名稱:SHIP1 0.2ml
磷酸化糖皮質(zhì)調(diào)節(jié)激酶1抗體英文名稱:Phospho-SGK1 (Thr256) 0.1ml
C-SKI抗體英文名稱:SKI 0.1ml
50T轉(zhuǎn)基因植物NPTII基因PCR檢測試劑盒氯化鈉結(jié)晶紫增液 Sodium Chloride Violet purple Enrichment Broth 250g
氯化鈉蔗糖瓊脂 Sodium Chloride Sucrose Agar 250g
嗜鹽選擇性瓊脂 Halophilic Bacteria Selective Agar 250g
氯化鈉血瓊脂基礎(chǔ) Sodium Chloride Blood Agar Base 250g
霍亂雙糖鐵瓊脂(KIA) KIA 250g
T1N1瓊脂 T1N1 Agar 250g
T1N0肉湯 TIN0 Broth 250g
T1N3肉湯 T1N3 Broth 250g
精氨酸葡萄糖斜面瓊脂(AGS) Arginine Dextrose Agar 100
mCPC培養(yǎng)基 mCPC Medium 250g
mCPC培養(yǎng)基添加劑 mCPC Medium Supplement 1ml*5
副溶血性弧瓊脂 Vibrio parahaemolyticus agar 250g
副溶血性弧增液 Vibrio parahaemolyticus Broth 250g
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。