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操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
我司主營(yíng)產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),并經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè),我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時(shí),且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠腫瘤壞死因子α(TNFα)博湖ELISA試劑盒 |
英文名稱 |
Mouse TNFα ELISA Kit |
貨號(hào) |
PM103706 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶?jī)龈善贰?br>
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進(jìn)行30倍稀釋。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè),且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過(guò)程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上,使用前請(qǐng)離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
沙丁胺醇標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Albuterol 規(guī)格: 200mg 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
沙丁胺醇相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Albuterol Related Compound A 規(guī)格: 25mg 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
乙醇測(cè)定用乙醇對(duì)照溶液標(biāo)準(zhǔn)品(乙醇水溶液)
英文名稱 Alcohol Determination--Alcohol 規(guī)格: 5mlX5ampules 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
乙醇測(cè)定用內(nèi)標(biāo)對(duì)照溶液標(biāo)準(zhǔn)品(乙睛水溶液) 英文名稱 規(guī)格: 5mlX5ampules 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
阿氯米松雙酯標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Alclometasone Dipropionate 規(guī)格: 300mg 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
乙醇標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Alcohol 規(guī)格: 1.2mLx5ampules 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
無(wú)水乙醇標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Dehydrated Alcohol 規(guī)格: 1.2mLx5ampules 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
阿侖磷酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Alendronate Sodium 規(guī)格: 200mg 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
阿力甜標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Alitame 規(guī)格: 250mg 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
鹽酸阿夫嗪標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Alfuzosin Hydrochloride 規(guī)格: 150mg 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn) Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-TFPI2 Immunomagnetic Beads IP 5 mL
Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-TFPI2 Immunomagnetic Beads IP 5 mL
人 MAP1D / Methionine Aminopeptidase 1D 桿狀病毒-昆蟲(chóng)細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
甲型流感 H1N1 (A/New Caledonia/20/1999) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
TBP 抗體, 兔多抗, 抗原親和純化 WB 50 μg
人 KCTD15 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 IL10RB / CRFB4 ELISA配對(duì)抗體
重組食蟹猴 IL-8 / CXCL8 蛋白
小鼠 BCMA / TNFRSF17 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)
大鼠 NSDHL 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 NANOG 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 PD1 / PDCD1 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠腫瘤壞死因子α(TNFα)博湖ELISA試劑盒Factor X 凝血因子10抗體 0.2ml
谷氨酰胺酶2(GLS2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glutaminase 2 (GLS2) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
Flightless 1 凝溶膠蛋白家族Fli-1抗體 0.2ml
Cylicin 2蛋白(CYLC2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cylicin 2 (CYLC2) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
BEX4 腦表達(dá)X連鎖蛋白4抗體 0.2ml
景天庚酮糖激酶(SHPK)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Sedoheptulokinase (SHPK) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
CCDC120 卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白120抗體 0.2ml
Clarin 1蛋白(CLRN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Clarin 1 (CLRN1) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
FAM120B 組織激活過(guò)氧化酶活化增生受體γ蛋白抗體 0.2ml
生長(zhǎng)分化因子1(GDF1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Growth Differentiation Factor 1 (GDF1) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)
DPP9/DPRP2 二肽基肽酶9抗體 0.2ml
纖維介素蛋白(FGL2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Fibrigen Like Protein 2 (FGL2) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)