試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶?jī)龈善贰?br> 3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營(yíng)產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè)，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時(shí)，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè)，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過(guò)程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請(qǐng)離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
3-甲-4-溴吡分子式：172.02分子量： C6H6BrN英文名稱：3- methyl -4-CAS號(hào)：10168-00-0

5-甲硫四氮分子式：116.14分子量： C2H4N4S英文名稱：5- methylthio tetrazoleCAS號(hào)：29515-99-9

2-甲并咪分子式：132.16分子量： C8H8N2英文名稱：2- methyl benzimidazoleCAS號(hào)：615-15-6

1,2,4-分子式：120.19分子量： C9H12； C6H3(CH3)3英文名稱：1,2,4- three methyl benzeneCAS號(hào)：95-63-6

4-(4-)啉分子式：188.23分子量： C11H12N2O英文名稱：4- (4-) Ma LanCAS號(hào)：10282-31-2

1-丙吡氯分子式：157.64分子量： C8H12ClN英文名稱：1- pyridine chlorideCAS號(hào)：23271-47-8

2,4,5-三氯甲分子式：195.47分子量： C7H5Cl3英文名稱：2,4,5- threeCAS號(hào)：6639-30-1

對(duì)二溴分子式：235.91分子量： C6H4Br2英文名稱：On the two bromobenzeneCAS號(hào)：106-37-6

磺胺甲噻二分子式：270.33分子量： C9H10N4O2S2英文名稱：Two of methylCAS號(hào)：144-82-1

對(duì)二芐氧分子式：290.36分子量： C20H18O2英文名稱：On two benzyl oxygen groupCAS號(hào)：621-91-0人 DAP 基因全長(zhǎng)ORF克隆

人 DAP 基因全長(zhǎng)ORF克隆

人 HSPA8 基因全長(zhǎng)ORF克隆

人 VHR 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 DICER1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

重組人 IFNα4 / IFNa4 / Interferon alpha-4 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)

甲型流感 H5N1 (禽流感) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) ELISA配對(duì)抗體

人 FSH alpha / TSH alpha / CGA 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 LYPLA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無(wú)標(biāo)簽

人 CPLX3 / Complexin 3 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 FAP 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶His標(biāo)簽

大鼠 VEGFR2 / Flk-1 / CD309 / KDR 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠肥大細(xì)胞類胰蛋白酶(MCT)ELISA試劑盒Rabbit anti-mouse Kappa light chain  兔抗小鼠k鏈 1mg

血管緊張素1-7(Ang1-7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Angiotensin 1-7 (Ang1-7)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

Goat Anti-Mouse IgM/HRP  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗小鼠IgM 0.1ml

NADH脫氫酶4(ND4)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for NADH Dehydrogenase 4 (ND4)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

Goat Anti-human IgM/APC  APC標(biāo)記的羊抗人IgM 0.1ml

鹽皮質(zhì)受體(MR)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Mineralocorticoid Receptor (MR)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

Mouse Anti-Rabbit IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標(biāo)記的小鼠抗兔IgM 0.1ml

蛋白O-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶1(POFUT1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Protein O-Fucosyltransferase 1 (POFUT1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

Rabbit Anti-Bov IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350標(biāo)記的兔抗牛IgG  0.1ml

細(xì)胞周期素F(CCNF)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Cyclin F (CCNF)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

Rabbit Anti-Goat IgG/Bio  生物素標(biāo)記的兔抗羊IgG 0.1ml

驅(qū)動(dòng)結(jié)合蛋白1(KTN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Kinectin 1 (KTN1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)