試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實驗順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
3--2,6二溴吡分子式：251.91分子量： C5H4Br2N2英文名稱：3- amino -2,6 dibromopyridineCAS號：39856-57-0

2--3-硝-6-甲氧吡分子式：169.14分子量： C6H7N3O2英文名稱：2- amino -3- nitro -6-CAS號：73896-36-3

3-氯-5-三氟甲吡分子式：181.54分子量： C6H3ClF3N英文名稱：3- -5- threeCAS號：85148-26-1

4-(3-丙)吡分子式：197.28分子量： C14H15N英文名稱：4- (3-) pyridineCAS號：2057-49-0

4-甲-4H-3-巰-1,2,4-三氮分子式：115.16分子量： C3H5N3S英文名稱：4甲- 4h-3 -巰-1,2,4-三氮CAS號：24854-43-1

雪膽素甲英文名稱：Snow gallCAS號：58546-34-2分子式：562.73分子量：C32 H50 O8

對硝碘分子式：249.01分子量： C6H4INO2英文名稱：On m-nitroiodobenzeneCAS號：636-98-6

2-溴-5-硝-3-甲吡分子式：217.02分子量： C6H5BrN2O2英文名稱：2- -5- nitro -3-CAS號：23132-21-0

1-芐-4-羥分子式：191.27分子量： C12H17NO英文名稱：1- benzyl -4- piperidineCAS號：4727-72-4

二(六氟乙酰)合鈷(II)水合物分子式：473.04分子量： C10H2CoF12O4·xH2O英文名稱：Two (six f) CO (II) hydrateCAS號：19648-83-0重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 (His 標(biāo)簽)

重組小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 蛋白 (His 標(biāo)簽)

人 TP53AIP1 基因全長ORF克隆

人 WT1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

小鼠 S100A3 基因全長ORF克隆

人 HCFC1 基因全長ORF克隆

小鼠 STIM1 基因全長ORF克隆

人 DCUN1D1 基因全長ORF克隆

Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-DDR1 / MCK10 / CD167 Immunomagnetic Beads IP    5 mL

人 LYG1 基因全長ORF克隆

人 CHMP2B 基因全長ORF克隆

人 Hemopexin / HPX ELISA配對抗體

小鼠多巴胺(DA)免費(fèi)代測ELISA KitP53 protein(wt-p53)  腫瘤抑制基因P53蛋白抗體（野生型P53） 0.1ml

脂質(zhì)運(yùn)載蛋白1(LCN1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Lipocalin 1 (LCN1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Phospho-Paxillin(Ser178)  磷酸化樁蛋白Paxillin抗體 0.1ml

發(fā)動蛋白2(DNM2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Dynamin 2 (DNM2)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

PIBF  孕誘導(dǎo)阻斷因子抗體 0.2ml

角蛋白20(KRT20)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Keratin 20 (KRT20)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

hnRNP K  異質(zhì)核糖核蛋白K抗體 0.2ml

V-Myc骨髓細(xì)胞瘤病毒癌基因同源物(MYC)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for V-Myc Myelocytomatosis Viral Oncogene Homolog (MYC)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Raptor  mTOR相關(guān)調(diào)控蛋白抗體 0.2ml

鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Caldesmon (CALD)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

S100B  S100B蛋白抗體 0.1ml

視黃醇結(jié)合蛋白4(RBP4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Retil Binding Protein 4, Plasma (RBP4)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)