試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶?jī)龈善贰?br> 3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營(yíng)產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè)，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時(shí)，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請(qǐng)不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè)，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請(qǐng)離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
檸檬酸二銅分子式：568.84分子量： C12H10Cu3O14英文名稱：檸檬酸二銅CAS號(hào)：866-82-0

4,7-二(2-)-2,1,3-并噻二分子式：300.41分子量： C14H8N2S3英文名稱：4,7- two (2-) -2,1,3- twoCAS號(hào)：165190-76-1

4-羥甲噻分子式：115.15分子量： C4H5NOS英文名稱：4- hydroxymethyl thiazoleCAS號(hào)：1875983

非那雄胺英文名稱：Non that maleCAS號(hào)：98319-26-7分子式：372.54分子量： C23H36N2O2

甲磺酸鉀分子式：134.2分子量： CH3KO3S英文名稱：Potassium methyl sulfonic acidCAS號(hào)：2386-56-3

(R)-3-甲酯鹽酸鹽分子式：分子量：英文名稱：(R) -3- methyl piperidine hydrochlorideCAS號(hào)：

4-N-BOC-分子式：200.28分子量： C10H20N2O2英文名稱：Aminopiperidine 4-N-BOC-CAS號(hào)：73874-95-0

9B,11B-環(huán)氧-16B-甲孕甾-1,4-二-17A,21-二-3,20-二酮英文名稱：9B, 11B-, -16B-, -17A, -1,4-, 21-, -3,20- two,,CAS號(hào)：981-34-0分子式：370.44分子量： C22H28O5

1-溴-2,3,4,6-四氟分子式：140.1118032分子量： C7H5FO2英文名稱：1- -2,3,4,6- four fluoro bromideCAS號(hào)：1559-86-0

乙酸鍶分子式：214.71分子量： C4H6O4Sr·1/2H2O英文名稱：Strontium acetateCAS號(hào)：543-94-2重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白

重組小鼠 IL-12 (IL12A & IL12B Heterodimer) 蛋白

大鼠 BCAP31 基因全長(zhǎng)ORF克隆

人 CTSC / DPPI 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 EG-VEGF / prokineticin-1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠 TYMP 基因全長(zhǎng)ORF克隆

甲型流感 H5N1 (A/common magpie/Hong Kong/5052/2007) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

重組甲型流感 H3N2 神經(jīng)氨酸酶 (Neuraminidase / NA) (E119V mutation) (高活性)

人 BANP 基因全長(zhǎng)ORF克隆

小鼠 Semaphorin 5A / SEMA5A 人細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

人 UBAC2 基因全長(zhǎng)ORF克隆

人 PAD4 / PADI4 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽(yáng)性對(duì)照) (變性)

小鼠促紅細(xì)胞**素(EPO)博湖ELISA試劑盒p53BP1/53BP1  p53結(jié)合蛋白1抗體 0.2ml

血管細(xì)胞粘附分子1(VCAM1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Vascular Cell Adhesion Molecule 1 (VCAM1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

PCNA  增殖細(xì)胞核抗原抗體 0.1ml

歸巢關(guān)聯(lián)細(xì)胞黏附分子(HCAM)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Homing Associated Cell Adhesion Molecule (HCAM)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

PIRH2  泛素連接酶抗體 0.1ml

催乳素(PRL)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Prolactin (PRL)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

EIF2AK2/PKR  蛋白激酶R抗體 0.1ml

乳酸脫氫酶A(LDHA)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Lactate Dehydrogenase A (LDHA)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

RALDH2  視黃醛脫氫酶2型抗體 0.1ml

T-細(xì)胞白血病/瘤蛋白1A(TCL1A)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for T-Cell Leukemia/Lymphoma Protein 1A (TCL1A)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)

S100A6BP/CACYBP  鈣周期素結(jié)合蛋白抗體 0.2ml

巨噬細(xì)胞來(lái)源趨化因子(MDC)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法)    ELISA Kit for Macrophage Derived Chemokine (MDC)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)