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操作流程:
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl,每種樣品設(shè)3個平行孔;設(shè)兩個陰性對照孔,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設(shè)一個空白對照孔,加入純細胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對照(N)的 OD值后,計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
我司主營產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴格地反復(fù)地檢測,我們以嚴謹?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時,且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠β-防御素(β-DF)ELISA Kit |
英文名稱 |
Mouse β-Defensins,β-DF ELISA Kit |
貨號 |
PM104454 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進行30倍稀釋。
樣本實驗前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
(4)細胞培養(yǎng)上清:
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
(5)培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
注意事項:
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測,且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請在試驗中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上,使用前請離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時,請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2,6-二氟甲分子式:128.12分子量: C7H6F2英文名稱:2,6- two fCAS號:443-84-5
鎢酸鋁分子式:797.48分子量: Al2O12W3英文名稱:Aluminium tungstenCAS號:15123-82-7
氯1-丙-3-甲咪分子式:158.63分子量: C7H11ClN2英文名稱:Chlorinated 1- -3- methyl groupCAS號:65039-10-3
3,3-二甲-2,3-二氫-1,2-并異噻1,1-二氧物分子式:197.25分子量: C9H11NO2S英文名稱:3,3- two -2,3- two methyl hydrogen -1,2- benzo isothiazolin 1,1- dioxideCAS號:102362-98-1
六氯英文名稱:SixCAS號:118-74-1分子式:284.78分子量: C6Cl6
阿利新藍8GX英文名稱:Alcian blue 8GXCAS號:75881-23-1分子式:分子量: C56H68N16S4Cl1
澤瀉-B-23-醋酯英文名稱:Alisol -B-23- acetateCAS號:26575-95-1分子式:444.65分子量:C28H44O4
酒石酸銻鉀分子式:667.87分子量: C8H10K2O15Sb2英文名稱:Antimony potassium antimonyCAS號:28300-74-5
竹葉香附素A英文名稱:Bamboo Cyperus ACAS號:89412-79-3分子式:897.11分子量:C47H76O16
2-羥-3-三氟甲吡分子式:163.1分子量: C6H4F3NO英文名稱:2- hydroxy -3- threeCAS號:22245-83-6重組食蟹猴 RANKL / OPGL / TNFSF11 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
重組食蟹猴 RANKL / OPGL / TNFSF11 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
小鼠 SELP / selectin P / P-selectin 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 aFGF / FGF1 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)
中東呼吸綜合征 MERS-CoV (HCoV-EMC/2012) Spike Protein S2 (aa 726-1296) 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
小鼠 LCN2 / NGAL 基因全長ORF克隆
人 P2RX2 基因全長ORF克隆
小鼠 Smad3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標(biāo)簽
食蟹猴 ACVR1B / ALK-4 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)
人 VASN 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標(biāo)簽
人 LRAP / ERAP2 基因全長ORF克隆
大鼠 TUBA1A 基因全長ORF克隆
小鼠β-防御素(β-DF)ELISA Kit轉(zhuǎn)化生長因子α(TGFα)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光分析法) 進口、原裝 英文名稱: Homo sapiens (Human)
PHD指蛋白8(PHF8)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for PHD Finger Protein 8 (PHF8) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光分析法) 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱: Homo sapiens (Human)
脊髓灰質(zhì)炎病毒受體相關(guān)分子1(PVRL1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Poliovirus Receptor Related Protein 1 (PVRL1) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光分析法) 特價促銷 英文名稱: Mus musculus (Mouse)
Zeste同源物增強子1(EZH1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Enhancer Of Zeste Homolog 1 (EZH1) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
轉(zhuǎn)化生長因子β1(TGFβ1)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光分析法) 進口、分裝 英文名稱: Rattus rvegicus (Rat)
三葉因子1(TFF1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Trefoil Factor 1 (TFF1) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
組織金屬蛋白酶抑制因子3(TIMP3)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光分析法) 進口、原裝 英文名稱: Homo sapiens (Human)
趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Chemokine C-C-Motif Ligand 3 Like Protein 1 (CCL3L1) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)
腫瘤壞死因子α(TNFα)檢測試劑盒(化學(xué)發(fā)光分析法) 現(xiàn)貨供應(yīng) 英文名稱: Bos taurus; Bovine (Cattle)
轉(zhuǎn)化生長因子β受體Ⅰ(TGFβR1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法) ELISA Kit for Transforming Growth Factor Beta Receptor I (TGFbR1) 規(guī)格:48T/96T 進口、國產(chǎn)