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操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
我司主營(yíng)產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),并經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè),我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時(shí),且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠前腦啡肽(PENK)免費(fèi)代測(cè)ELISA Kit |
英文名稱 |
Mouse Proenkephalin(PENK)ELISA Kit |
貨號(hào) |
PM105124 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶?jī)龈善贰?br>
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進(jìn)行30倍稀釋。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè),且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過(guò)程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上,使用前請(qǐng)離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
頭孢酮S異構(gòu)體 英文名稱 系統(tǒng)適應(yīng)性 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
杜柳毒苷 英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
依西美坦中間體(雄烯二酮) 英文名稱 檢查 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
甘草酸銨 英文名稱 含量測(cè)定 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)
惡酮 標(biāo)準(zhǔn)品 CAS號(hào):131807-57-3 2ml 英文名稱 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
酸棗仁皂苷B 英文名稱 酸棗仁皂甙B 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量: Jujuboside B
雙苯氟脲 標(biāo)準(zhǔn)品 CAS號(hào):116714-46-6 50mg 英文名稱 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量:
郁金(溫郁金) 英文名稱 中藥對(duì)照藥材 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量: TLC法鑒別
三氯叔丁醇 英文名稱 對(duì)照品 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量: GC鑒別用
諾米林 英文名稱 Nomilin 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量: HPLC≥98%
丹皮酚 英文名稱 Paeonol 規(guī)格: 20mg/支進(jìn)口/國(guó)產(chǎn) 含量: HPLC≥99%Docosahexaenoyl Ethanolamide-d4 (5 mg)N-(2-hydroxyethyl-1,1’,2,2’-d4)-4Z,7Z,10Z,13Z,16Z,19Z-docosahexaenamide; DEA-d4|DHEA-d4; Docosahexaenoyl Ethanolamide-d4
10X Red Blood Cell Lysis Buffer10X Red Blood Cell Lysis Buffer
Eicosapentaenoyl Serotonin (5 mg)N-[2-(5-hydroxy-1H-indol-3-yl)ethyl]-5Z,8Z,11Z,14Z,17Z-eicosapentaenamide; Eicosapentaenoyl Serotonin
Bisindolylmaleimide IV (1 mg)3,4-di-1H-indol-3-yl-1H-pyrrole-2,5-dione; Arcyriarubin A|BIM IV; Bisindolylmaleimide IV
Precoated (Mouse Anti-Rabbit IgG) EIA 96-Well Strip Plate (5 ea)Precoated (Mouse Anti-Rabbit IgG) EIA 96-Well Strip Plate
Proscillaridin A (25 mg)(3β)-3-[(6-deoxy-α-L-mannopyranosyl)oxy]-14-hydroxy-bufa-4,20,22-trienolide; A-32686|NSC 7521|PSC-801; Proscillaridin A
13,14-dihydro-15(R,S)-hydroxy-16,16-difluoro Prostaglandin E1-d4 (50 ug)9-oxo-11α,15R,S-dihydroxy-16,16-difluoro-prostan-1-oic-3,3,4,4-d4 acid; 15-hydroxy Lubiprostone; 13,14-dihydro-15(R,S)-hydroxy-16,16-difluoro Prostaglandin E1-d4
2-Methyl-1,4-naphthoquinone, Vitamin K3Menadione
UR- N-(5-methylhexyl) analog (10 mg)(1-(5-methylhexyl)-1H-indol-3-yl)(2,2,3,3-tetramethylcyclopropyl)methanone; UR- N-(5-methylhexyl) analog
(S)-HDAC-42 (1 mg)N-[4-[(hydroxyamino)carbonyl]phenyl]-αS-(1-methylethyl)-benzeneacetamide; AR42; (S)-HDAC-42
Conoidin A (25 mg)2,3-bis(bromomethyl)-quinoxaline 1,4-dioxide
Clozapine N-oxide8-chloro-11-(4-methyl-4-oxido-1-pipeazinyl)-5H-dibenzo[b,e][1,4]diazepine
小鼠前腦啡肽(PENK)免費(fèi)代測(cè)ELISA Kit 少突膠質(zhì)前體細(xì)胞分化培養(yǎng)基 500 ml特價(jià)供應(yīng) OPCDM-prf
雞17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA試劑盒英文名稱:Hydroxycorticosteroids,17-OHCS ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T蛋白激酶C(PKC)ELISA Kit,48T/96T
雪旺細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml現(xiàn)貨促銷 SCM-prf
兔血纖蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit Fibrigen,Fbg ELISA Kit規(guī)格:96T/48T多巴胺-β羥化酶(DBH)ELISA Kit,48T/96T
星形膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml特價(jià)供應(yīng) AM-prf
兔β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)ELISA試劑盒英文名稱:Rabbit amyloid beta peptide 1-40,Aβ1-40 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T肝素結(jié)合性表皮生長(zhǎng)因子(HB-EGF)ELISA Kit,48T/96T
小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml現(xiàn)貨促銷 MM-prf
兔子內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA試劑盒英文名稱:rabbit Endothelin 1,ET-1 ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T甘露糖凝集素受體(MBLR)ELISA Kit,48T/96T
成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 500 ml特價(jià)供應(yīng) FM-acf-prf
兔子膠原酶I(Collagenase I)ELISA試劑盒 英文名稱:Rabbit Collagenase I ELISA Kit規(guī)格:96T/48TT細(xì)胞生長(zhǎng)因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ)ELISA Kit,48T/96T
成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基-2 500 ml現(xiàn)貨促銷 FM-2-prf
猴白介素6(IL-6)ELISA試劑盒英文名稱:Monkey Interleukin 6,IL-6 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T胸腺肽α1(Thymosin α1)ELISA Kit,48T/96T