試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標準品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準備：
1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴格按照相關(guān)標準進行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴格地反復(fù)地檢測，我們以嚴謹?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實驗前準備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
（5）培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準確，每次檢測均需做標準曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
2-氨基-5-硝基二苯酮（硝西泮雜質(zhì)) 英文名稱 有關(guān)物質(zhì)  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn)

比枯枯靈 英文名稱 畢扣扣靈堿；荷包牡丹堿；山烏龜堿  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： (+)-Bicuculline

野黃芩苷（燈盞花乙素） 英文名稱 Scutellarin  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%

帕司煙肼（對氨基水楊酸異煙肼） 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： UV法溶出度檢查

法莫替丁 英文名稱 含量測定  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn)

蔗糖 英文名稱 對照品  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： 含量測定

酸棗仁 英文名稱 TLC法鑒別  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn)

芡實 英文名稱 TLC法鑒別  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn)

迷迭香酸 英文名稱   規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： Rosmarinic acid

黃芪皂苷-Ⅲ 英文名稱 Astragaloside -Ⅲ  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： ≥98%

桑色素 英文名稱 Morin  規(guī)格:  20mg/支進口/國產(chǎn) 含量： HPLC≥98%NMDA （500 mg）N-methyl-D-aspartic acid； N-Methyl-D-Aspartic Acid； NMDA

Finasteride （250 mg）（4aR，4bS，6aS，7S，9aS，9bS，11aR）-N-（1，1-dimethylethyl）-2，4a，4b，5，6，6a，7，8，9，9a，9b，10，11，11a-tetradecahydro-4a，6a-dimethyl-2-oxo-1H-indeno[5，4-f]quinoline-7-carboxamide； MK 906|Propecia |Proscar ； Finasteride

Clencyclohexerol （1 mg）4-

Prostaglandin E1 ethyl ester （500 ug）11α，15S-dihydroxy-9-oxo-prost-13E-en-1-oic acid， ethyl ester； Alprostadil ethyl ester|PGE1 ethyl ester； Prostaglandin E1 ethyl ester

Alsterpaullone （1 mg）7，12-dihydro-9-nitro-indolo[3，2-d][1]benzazepin-6（5H）-one； 9-Nitropaullone|NSC 705701； Alsterpaullone

Bicyclo Prostaglandin E1 （50 mg）11-deoxy-13，14-dihydro-15-keto-11。beta。，16。xi。-cycloprostaglandin E1； Bicyclo PGE1； Bicyclo Prostaglandin E1

3-（4-Pyridyl）-1H-indoleROCK Inhibitor （Rockout）

Caspase 3熒光底物 Z-DEVD-AMCZ-DEVD-AMC

Citreoviridin （500 ug）2,5-anhydro-1,6-dideoxy-2-C-[（8-（4-methoxy-5-methyl-2-oxo-2H-pyran-6-yl）-2-methyl-1E,3E,5E,7E-octatetraen-1-yl]-4-C-methyl-D-iditol

RCS-8 （exempt preparation） （1 mg）BTM-8|SR-18； 1-（1-（2-cyclohexylethyl）-1H-indol-3-yl）-2-（2-methoxyphenyl）ethanone

2-（4-（4-Chlorophenoxy）phenyl）-1H-benzimidazole-5-carboxamideChk2 Inhibitor

Ac-YVAD-AFC， Caspase-1熒光底物Caspase-1 Substrate YVAD-AFC

小鼠核因子I/B(NFIB)免費代測ELISA Kit癌組織源性原代細胞 規(guī)格: 5 × 105次方（1ml）/1ml

軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(COMP)ELISA試劑盒 英文名稱：Human cartilage oligomeric matrix protein,COMP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠前列腺素E1(PGE1)ELISA Kit，48T/96T 進口/分裝

卵巢癌組織源性原代細胞 規(guī)格: 5 × 105次方（1ml）/1ml

小鼠抗紅細胞抗體(RBC)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse anti-red cell antibody ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T游離雌三醇(FE3)ELISA Kit，48T/96T 進口/國產(chǎn)

癌組織源性原代細胞 規(guī)格: 5 × 105次方（1ml）/1ml

小鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Brain derived neurotrophic facor,BDNF ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠抗平滑肌抗體(ASMA)ELISA Kit，48T/96T 進口/分裝

宮頸癌組織源性原代細胞 規(guī)格: 5 × 105次方（1ml）/1ml

小鼠過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPAR-α)ELISA試劑盒 英文名稱：Mouse peroxisome proliferators activator receptors alpha,PPAR-α ELISA Kit規(guī)格:96T/48T抗呼吸道合胞病毒抗體(RSV)ELISA Kit，48T/96T

皮膚癌組織源性原代細胞 規(guī)格: 5 × 105次方（1ml）/1ml

小鼠血小板衍生生長因子AB(PDGF-AB)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse Platelet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T大鼠脂蛋白脂酶(LPL)ELISA Kit，48T/96T

膠質(zhì)瘤組織源性原代細胞 規(guī)格: 5 × 105次方（1ml）/1ml

小鼠顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒英文名稱：Mouse granzymes A,Gzms-A ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠促黃體(LH)ELISA Kit，48T/96T