試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶?jī)龈善贰?br> 3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營(yíng)產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過(guò)了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè)，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時(shí)，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請(qǐng)不要使用過(guò)期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè)，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過(guò)程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請(qǐng)離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過(guò)夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過(guò)洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
7% NaC1胰胨水發(fā)酵管BR20支國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)重組蛋白英文名稱：Recombinant Enolase, Neuron Specific (NSE)

地衣芽孢桿 Bacillus licheniformis米曲霉 Aspergillus oryzae

念珠顯色培養(yǎng)基 規(guī)格： 1000ml/瓶 用途： 用于念珠特別是白色念珠的選擇性分離和初步鑒別

胰凝蛋白酶(含100mL酶解緩沖液)Annexin V-FITC/PI雙染法細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

YAC-1(小鼠瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2

大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum枝芽胞 Virgibacillus sp.

大鼠內(nèi)臟脂肪細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL

高鹽察氏瓊脂/高鹽察氏培養(yǎng)基/Salt Czapek Dox Agar用于霉和酵母的計(jì)數(shù)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

大鼠腦靜脈血管平滑肌細(xì)胞完全培養(yǎng)基大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基

NCI-H295R(腎上腺皮質(zhì)腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2N-AGI-5198

無(wú)水磷氫二鉀（1KG）Sodium Pyruvate， Sodium Pyruvate

PHA 665752 （25 mg）（3Z）-5-[[（2,6-dichlorophenyl）methyl]sulfonyl]-3-[[3,5-dimethyl-4-[[（2R）-2-（1-pyrrolidinylmethyl）-1-pyrrolidinyl]carbonyl]-1H-pyrrol-2-yl]methylene]-1,3-dihydro-2H-indol-2-one

IP Receptor （mouse） Blocking Peptide （1 ea）Prostacyclin Receptor|PGI2 Receptor|Prostaglandin I2 Receptor； IP Receptor （mouse） Blocking Peptide

-+)-Cloprostenol isopropyl ester (50 mg)(+)-16-m-chlorophenoxy tetranor Prostaglandin F2α isopropyl ester, -+)-Cloprostenol isopropyl ester, (+)-9α,11α,15R-trihydroxy-16-(3-chlorophenoxy)-17,18,19,2-tetranor-prosta-5Z,13E-dien-1-oic acid, isopropyl ester

Guanethidine （sulfate） （100 mg）N-

1，2-Dioleoyl-sn-glycerol （100 mg）1，2-bis（O-9Z-octadecenoyl）-sn-glycerol； 1，2-Dioleoyl-sn-glycerol

Phosphatase Inhibitor Cocktail IV， EZBlockEZBlock Phosphatase Inhibitor Cocktail IV

N1-（4-chlorophenyl）-6-methyl-N5-[3-（9H-purin-6-yl）-2-pyridinyl]- 1，5-IsoquinolinediamineB-Raf Inhibitor 1

1，4-Dihydroxy-5，8-bis[[2-[（2-hydroxyethyl）amino]ethyl]amino]-9，10-anthracenedioneMitoxantrone

4mM 氨烯丙基UTP鈉溶液AA-UTP [Aminoallyl UTP sodium salt] 4 mM in TE buffer

NSC 23766 （hydrochloride） （10 mg）N6-[2-[[4-（diethylamino）-1-methylbutyl]amino]-6-methyl-4-pyrimidinyl]-2-methyl-4，6-quinolinediamine， trihydrochloride； NSC 23766 （hydrochloride）

小鼠谷氨酰胺酶2(GLS2)ELISA試劑盒NCI-H2087(非小細(xì)胞肺腺細(xì)胞)鏈霉 Streptomyces sp.

卵泡抑素(FS)ELISA試劑盒英文名稱：Human Follistatin，F(xiàn)S ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠17-酮類固醇(17-KS)ELISA Kit，48T/96T 進(jìn)口/分裝

米曲霉 Aspergillus oryzaeAna-1(小鼠巨噬細(xì)胞)

8羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)ELISA試劑盒英文名稱：Human hydroxylysine，Hyl ELISA Kit規(guī)格:96T/48T豬巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)ELISA Kit，48T/96T 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)

黑曲霉 Aspergillus niger釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae

白細(xì)胞彈性蛋白酶(HLE)ELISA試劑盒 英文名稱：Human leukocyte exastase，HLE ELISA Kit規(guī)格:96T/48T兔子神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4(NT-4)ELISA Kit，48T/96T 進(jìn)口/分裝

大鼠胰島素細(xì)胞貴州綠僵 Metarhizium guizhouense

肌紅蛋白(MYO/MB)ELISA試劑盒英文名稱：Human Myoglobin，MYO/MB ELISA Kit規(guī)格:96T/48T犬轉(zhuǎn)移生長(zhǎng)因子β1(TGF-β1)ELISA Kit，48T/96T 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae肝細(xì)胞

血小板因子3(PF-3)ELISA試劑盒英文名稱：Human platelet factor 3， PF3 ELISA Kit規(guī)格:96T/48T腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體4(TRAIL-R4)ELISA Kit，48T/96T進(jìn)口/分裝

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiaeHuH-7肝細(xì)胞

淀粉樣前體蛋白(βAPP)ELISA試劑盒英文名稱：Human β amyloid precursor protein，βAPP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T卵巢癌標(biāo)志物CA125ELISA Kit，48T/96T 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)