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細胞接收后的處理：
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
K7M2 wt
1×106
P-X8982
產(chǎn)品詳情：
細胞別稱；K7M2 wt; K7M2；小鼠骨肉瘤成骨細胞
種屬來源；小鼠
種屬來源；小鼠
組織來源；品系：BALB/c；器官：骨；
：骨肉瘤； 來源轉(zhuǎn)移灶：肺； 細胞類型：成骨細胞
生長特性；貼壁生長
細胞形態(tài)；成骨細胞樣
細胞代數(shù)；10代以內(nèi)
背景簡介；K7M2 wt [K7M2-WT]細胞抗原表達: CD31 陽性 [PubMed:1315100] 產(chǎn)物: 八因子 [PubMed: 11315100]; 整合唾液酸蛋白 (BSP) [PubMed11315100]; biglyan [PubMed: 11315100]; decorrin
[PubMed:1315100]; villin 2 (ezrin) [PubMed: 11325848]. 骨唾液酸蛋白,
biglyan, decorrin, 和 osteopontin 的表達顯示其骨家族細胞特性。
生物等級；1
細胞規(guī)格；1x106cells/T25或1mL凍存管
支原體檢測；無
保藏機構(gòu)；ATCC; CRL-2836
培養(yǎng)基；89%DMEM+10%FBS+1%PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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膜型卷曲相關(guān)蛋白MFRP抗體 |
大鼠促黃體(LH)elisa檢測試劑盒 |
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MFRP |
非位素AP－BCIP/NBT法DNA斑點雜交試劑盒 |
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雙PHD-D4鋅指蛋白2抗體 |
elisa分析檢測試劑盒 |
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DPF2 |
小鼠苯丙氨酸(LPA)elisa分析檢測試劑盒 |
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體液D-葡萄糖激酶法定量檢測試劑盒 |
通用型DAB顯色溶液 |
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人Tau蛋白（TAU）elisa檢測試劑盒 |
細胞分裂周期蛋白20B抗體 CDC20B |
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大鼠氨基端前心鈉肽(NT-ProANP)elisa檢測試劑盒 |
細胞球蛋白抗體 CYGB |
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小鼠松弛肽(RLN)elisa檢測試劑盒 |
TOMM70A蛋白抗體 TOMM70A |
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可溶性附著蛋白β-SNAP抗體 SNAP-beta |
WDFY3蛋白抗體 WDFY3 |
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造血干細胞特異性相關(guān)結(jié)合蛋白3抗體 HS1BP3 |
AF750標記的軟骨蛋白聚糖抗體 ADAMTS5, Alexa Fluor 750 conjugated |
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整合素αV（CD51）抗體 ITGAV |
APC標記人CD274 (B7-H1, PD-L1)單克隆抗體 human CD274 (B7-H1, PD-L1)/APC |
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富含亮氨酸重復蛋白8D抗體 LRRC8D |
巨細胞病毒PP65單克隆抗體 HCMV pp65 |
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鈣粘蛋白20抗體 Cadherin 20 |
KATNAL2蛋白抗體 KATNAL2 |
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HLA Class II DR4抗體 HLA Class II DR4 |
K7M2-WT 小鼠骨肉瘤成骨細胞葡萄糖6-磷酸脫氨酶2抗體 GNPDA2 |
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染色體及有絲分裂蛋白MIS12抗體 MIS12 |
大鼠型半胱氨酸(Hcy)elisa檢測試劑盒 |
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細胞脂質(zhì)過氧化物反式十八碳四烯酸（cis-parinaric acid）比色法測定試劑盒 |
植物中性蔗糖轉(zhuǎn)化酶（neutral invertase）活性比色法定量檢測試劑盒 |
實驗步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進行細胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。