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英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
DLD 1
1×106
P-X8925
產(chǎn)品詳情:
細(xì)胞別稱;DLD 1; DLD1; CoCL3;人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞
種屬來(lái)源;人
年齡性別;成年
組織來(lái)源;結(jié)直腸腺癌上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性;貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài);上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介;DLD-1細(xì)胞是由D·L·Dexter和其同事于1977-1979年分離的兩株結(jié)直腸腺癌細(xì)胞株中的一株。在ATCC和其它地方進(jìn)行的DNA指紋鑒定和染色體組型分析表明DLD-1細(xì)胞與HCT-15細(xì)胞相似,說(shuō)明這兩者是來(lái)自同一個(gè)人的不同克隆。DLD-1細(xì)胞和HCT-15細(xì)胞的遺傳起源可通過(guò)DNA指紋鑒定證實(shí),但染色體組型分析顯示它們?nèi)狈θ旧w標(biāo)記一致改變或數(shù)目上一致改變。DLD-1細(xì)胞的CSAp陰性(CSAp-),p53抗原表達(dá)呈陽(yáng)性(p53抗原產(chǎn)生了一個(gè)C→T點(diǎn)突變導(dǎo)致241位的Ser→Phe)。DLD-1細(xì)胞角蛋白過(guò)氧化物酶染色陽(yáng)性,癌基因c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、myb、sis和fos的表達(dá)呈陽(yáng)性,癌基因N-myc的表達(dá)未做檢測(cè)。DLD-1細(xì)胞表達(dá)腫瘤特異性核基質(zhì)蛋白CC-2、CC-3、CC-4、CC-5和CC-6。1979年提交到ATCC的DLD-1細(xì)胞代數(shù)不明且污染了支原體,其后經(jīng)過(guò)12周多種聯(lián)合培養(yǎng)處理,處理之后每周用Hoechst染色和標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)法檢測(cè)。其后連續(xù)11個(gè)月不加培養(yǎng),DLD-1細(xì)胞所有的檢測(cè)呈陰性。
STR位點(diǎn);Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11,12;D12S391:19,22;D13S317:8,11;D16S539:12,13;D18S51:11,17;D19S433:14,16;D21S11:29,32.2;D2S1338:17,25;D3S1358:17,17;D5S818:13,13;D6S1043:11,13;D7S820:10,12;D8S1179:15,15;FGA:22,22;Penta E:7,14;TH01:7,9.3;TPOX:8,11;vWA:18,19;
細(xì)胞代數(shù);10代以內(nèi)
生物等級(jí);1
細(xì)胞規(guī)格;1x106cells/T25或1mL凍存管
支原體檢測(cè);無(wú)
保藏機(jī)構(gòu);ATCC; CCL-221 BCRC; 60132 DSMZ; ACC-278 ECACC; 90102540
培養(yǎng)基;RPMI-1640+10%FBS+1%PS
培養(yǎng)條件;氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件;無(wú)血清凍存液,液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2)請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上,可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過(guò)夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理:
實(shí)驗(yàn)步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
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