相對定量分析方法  ：
2-ΔΔCt
前提：目標(biāo)序列和內(nèi)參序列的擴(kuò)增效率接近100％且偏差在5％以內(nèi)
 1、用內(nèi)參基因的CT值歸一目標(biāo)基因的CT值：
   ΔCT（test）= CT（target,test）-CT（ref,test） 
   ΔCT（calibrator）= CT（target,calibrator）-CT（ref, calibrator） 
 2、用校準(zhǔn)樣本的ΔCT值歸一試驗樣本的ΔCT值：
        ΔΔCT= ΔCT（test） - ΔCT（calibrator）
 3、計算表達(dá)水平比率：
                   2 –ΔΔCT=表達(dá)量的比值

參數(shù)規(guī)格：

產(chǎn)品名稱：熒光定量PCR試劑盒
貨號：BH-205599

使用方法:

一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA 段作為陽性對照。
2. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。

具有下列特點：
1.根據(jù) 指標(biāo)的保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應(yīng)。
2.靈敏度比常規(guī) PCR 高 2-3 個數(shù)量級，可以達(dá)到幾百拷貝/反應(yīng)。
3.即開即用，用戶只需要提供樣品模板，操作簡單，定量準(zhǔn)確快速。
4.一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5.本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應(yīng)體系的熒光定量 PCR。
6.本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
需要自備的器材：
1．儀器：分析天平、離心機(jī)、熒光 PCR 擴(kuò)增儀、組織研磨器、-20 ℃冰箱、可調(diào)移液器（2 μL、20
μL、200 μL、1000 μL）。
2．耗材：熒光 PCR 反應(yīng)管、眼科剪、眼科鑷、生理鹽水、1.5 mL 經(jīng)焦碳酸二乙酯（DEPC）水
處理的**離心管、吸頭（10 μL、200 μL、1000 μL）、**雙蒸水。

"10mL 亞氨二乙酸介質(zhì) IDA（Iminodiacetic Acid）Resin 常溫保存
1套 GST 固定試劑盒 GST  Immobilization Kit -20℃保存
1mg 谷胱甘肽S 轉(zhuǎn)移酶 GST(Glutathione S-Transferase) -20℃保存
10次 非變性法蛋白沉淀試劑盒 Non-Denaturing Protein Precipitation Kit  常溫保存
1.5mL 核酸劑 Nucleic Acid Erasol -20℃保存
50次 微量蛋白沉淀試劑盒 Mini Protein Precipitation Kit 常溫保存
15次 血清白蛋白劑 Serum Albumin Erasol 常溫保存
20次 蛋白劑  
12塊 SDS-PAGE預(yù)制膠 Instant SDS-PAGE Gel 4℃保存
30次 一站式SDS-PAGE電泳套裝 One-Stop SDS-PAGE Pack 丙烯酰胺溶液4℃保存，上樣緩沖液需要-20℃保存，其余常溫保存
500mL SDS-PAGE濃縮膠配膠液 SDS-PAGE Stacking Gel Buffer 4℃保存
500mL SDS-PAGE分離膠配膠液 SDS-PAGE Resolving Gel Buffer 4℃保存
1mL SDS-PAGE上樣液，5× SDS-PAGE Loading Buffer，5× -20℃保存
人 NUDC 基因全長ORF克隆
人 ALX1 基因全長ORF克隆
人 BRCC3 基因全長ORF克隆
熒光定量PCR試劑盒人 AKTIP 基因全長ORF克隆
人 DGUOK 基因全長ORF克隆
人 ATG5 基因全長ORF克隆
人 HSD17B14 基因全長ORF克隆
人 LRRC18 基因全長ORF克隆
人 EAF2 基因全長ORF克隆
人 PEX11B 基因全長ORF克隆
人 DCUN1D1 基因全長ORF克隆

注意事項：
1. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應(yīng)盡量避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致模板的降解，影響PCR效率。
2. 試劑Buffer AL若低溫保存，易產(chǎn)生沉淀。在使用前務(wù)必將其在室溫中放置一段時間，也可在37℃水浴中預(yù)熱10 min，以溶解沉淀，混勻后再使用。
3. 電泳檢測時，切勿使用含有SDS的Loading Buffer。否則，電泳時會在泳道中出現(xiàn)一大團(tuán)拖尾亮帶，影響實驗結(jié)果。
4. 建議擴(kuò)增片段長度1 kb以內(nèi)，以便擴(kuò)增效率佳。
?5. 為了您的**和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作