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細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
Molp8：Molp-8
1×106
P-X10015
產(chǎn)品詳情：
種屬來源：人
性別年齡：男性，47歲
組織來源：肺
生長特性：貼壁生長
細胞形態(tài)：上皮樣
細胞規(guī)格：1 X 106cells/T25或1 mL凍存管
培養(yǎng)條件：EMEM + 10% fetal bovine serum (FBS)+1%P/S 37 ℃, 5% CO2
凍存條件：90% FBS + 10% DMSO
傳代方法：1:6傳代, 3-4天傳1代
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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鈣結(jié)合線粒體載體蛋白抗體 Anti-SLC25A12/ARALAR |
單核細胞蛋白5抗體 Anti-SAMHD1/HDDC1/MOP5 |
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受體相互作用蛋白激酶1抗體 Anti-RIP1/RalBP1 |
抑瘤素M受體抗體 |
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細胞核因子/k基因結(jié)合核因子 p52/p100抗體 Anti-NFKB p52 |
閱讀障礙相關蛋白DLX2抗體 |
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鋅指蛋白ZBTB34抗體 Anti-ZBTB34 |
Tropomodulin 1 |
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OSMR |
原肌球蛋白調(diào)節(jié)蛋白1抗體 |
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電壓依賴型N型鈣通道α1B抗體 |
蛋白S抗體 Anti-Protein S/PROS |
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CACNA1B (N type) |
磷酸化細胞周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體 Anti-phospho-RAD9(Ser277) |
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三碘甲狀腺素T3抗體 Anti-T3 |
DYX2/KIAA0319 |
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大鼠N端前腦鈉素(NT-proBNP)elisa生化檢測試劑盒 |
鋅指蛋白672抗體 Anti-ZNF672 |
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NT-proBNP ELISA KIT |
神經(jīng)肽Y受體4抗體 Anti-NPY4R |
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人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)elisa生化檢測試劑盒 |
環(huán)指蛋白189抗體 Anti-Rffl/RING finger protein 189 |
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BMPR-ⅡELISAKit |
絲裂原活化蛋白激酶磷酸酶p38γ抗體 Anti-SAPK3/MAPK12/p38gamma |
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細胞MAPKAP KINASE3激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C） |
大鼠單核細胞趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)elisa生化檢測試劑盒 |
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人補體蛋白5(C5)elisa檢測試劑盒 |
ABC-1人非小細胞肺癌細胞小鼠再生胰島衍生蛋白1β(REG1β)elisa檢測試劑盒 |
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轉(zhuǎn)化生長因子β結(jié)合蛋白4抗體 |
BXDC1蛋白抗體 |
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LTBP4 |
BXDC1 |
實驗步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進行細胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。