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細胞接收后的處理：
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
CORL95：COR-L95
1×106
P-X9019
產(chǎn)品詳情：
細胞描述
該細胞源于一名43歲患有乳腺腺癌女性的胸腔積液，細胞呈多形性，大多數(shù)細胞在間接熒光染色時呈現(xiàn)與抗微管抗體的強烈反應。
細胞特性
1） 來源：人，女性，乳腺腺癌胸水轉(zhuǎn)移灶
2） 形態(tài)：有多核成分的多形細胞，貼壁生長
3） 含量：>1x10^6 細胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5）用途：僅供科研使用。
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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p53靶蛋白3抗體 Anti-TP53TG3 |
泛素結(jié)合蛋白P62抗體 Anti-SQSTM1/p62 |
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RAS癌基因家族蛋白RAB40C抗體 Anti-RAB40C |
磷脂酰肌醇-5-磷酸鹽-4激酶2型α抗體 |
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2型神經(jīng)纖維瘤抗體 Anti-NF2/Neurofibromin 2 |
磷酸化高遷移率核小體結(jié)合蛋白1 |
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神經(jīng)生長因子誘導蛋白抗體 Anti-VGF/Nerve growth factor inducible |
Rabbit Anti-Human IgA / PE-Cy5.5 |
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PIP4K2A |
PE-Cy5.5標記的兔抗人IgA |
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熱休克蛋白70樣蛋白抗體 |
磷酸化蛋白酶體PSMα3抗體 Anti-Proteasome 20S alpha 3(Ser250) |
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HSPA1L |
橋粒斑菲素蛋白1抗體 Anti-Plakophilin 1 |
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四分子交聯(lián)體15抗體（四旋蛋白） Anti-TSPAN15/NET-7 |
phospho-HMG14 (Ser20+Ser24) |
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大鼠 SCUBE1 elisa生化檢測試劑盒 |
鋅指蛋白ZBT10抗體 Anti-ZBT10 |
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Rat SCUBE1 ELISA Kit |
造血蛋白1抗體 Anti-NCKAP1L/HEM1 |
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人分泌型卷曲相關(guān)蛋白2(SFRP2)elisa生化檢測試劑盒 |
環(huán)指蛋白167抗體 Anti-RNF167 |
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HumanSFRP2ELISAKit |
泛素樣蛋白Sumo3抗體 Anti-Sumo 3 |
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豚鼠白介素18(IL-18)elisa生化檢測試劑盒 |
豬流行性乙型腦炎抗體(IgG)elisa檢測試劑盒 |
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調(diào)料D－乳酸比色法定量檢測試劑盒 |
MDA-MB-436 人乳腺癌細胞大鼠血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)elisa檢測試劑盒 |
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E3泛素蛋白連接酶MIB1抗體 |
鴨甲型肝炎病毒聚蛋白/鴨肝炎病毒抗體 |
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Mib1 |
Duck hepatitis A virus polyprotein |
實驗步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進行細胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。