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英文簡稱
規(guī)格
貨號
KB:KB
1×106
P-X808
產(chǎn)品詳情:
細(xì)胞別稱:KB;人口腔表皮樣癌細(xì)胞
種屬來源:人
年齡性別:30歲
組織來源:口腔
生長特性:貼壁生長
細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣
背景簡介:初認(rèn)為這個細(xì)胞源自口腔表皮癌,但隨后通過同工酶分析、HeLa標(biāo)記染色體和DNA指紋分析發(fā)現(xiàn),起源細(xì)胞已被HeLa污染。角蛋白陽性。有報(bào)告稱,KB細(xì)胞含有人瘤病毒18(HPV-18)序列。
生物等級:2
細(xì)胞規(guī)格:1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測:無
基因表達(dá)情況:keratin
保藏機(jī)構(gòu):ATCC; CCL-17 BCRJ; 0128 DSMZ; ACC-136 ECACC; 86103004 ECACC; 94050408
培養(yǎng)基:90%MEM+10% FBS
培養(yǎng)條件:氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件:無血清凍存液,液氮儲存
倍增時間:~30 hours
STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin:X;CSF1PO:9,10;D13S317:12,14;D16S539:9,10;D18S51:16;D19S433:13,14;D21S11:27,28;D2S1338:17;D3S1358:15,18;D5S818:11,12;D7S820:8,12;D8S1179:12,13;FGA:21;TH01:7;TPOX:8,12;vWA:16,18;
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理:
1)收到細(xì)胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細(xì)胞處理:
1)凍存細(xì)胞的復(fù)蘇::將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3)細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例:
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理:
實(shí)驗(yàn)步驟:
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上,利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板,轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品:
角蛋白相關(guān)蛋白11-1抗體 |
賴氨酰氧化酶樣蛋白4抗體 LOXL4 |
KAP11.1 |
細(xì)胞角蛋白71抗體 KRT71 |
APXL蛋白抗體 |
ATP調(diào)節(jié)鉀離子通道ROM K抗體 ROM-K/Kcnj1 |
APXL |
APC-Cy7標(biāo)記小鼠CD45R單克隆抗體 mouse CD45R/APC-Cy7 |
細(xì)胞生長抑制基因39蛋白抗體 FAM129A |
細(xì)胞抗原6G抗體 Ly-6G |
T細(xì)胞瘤浸潤和轉(zhuǎn)移蛋白2抗體 TIAM2 |
溶血磷脂酶1抗體 Lysophospholipase 1 |
α-(1,3)-巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶 4 FUT4 |
IV型己糖激酶抗體 IGLK |
熱休克蛋白70蛋白4抗體 HSPA4 |
KIAA1683蛋白抗體 KIAA1683 |
冰凍切片組織CYP1A2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒 |
真核翻譯起始因子3H抗體 eIF3H |
植物RNA提取試劑盒 50次 |
脂質(zhì)運(yùn)載蛋白相互作用膜受體蛋白抗體 LMBR1L |
體液亮(leucine)含量比色法定量檢測試劑盒 |
鈣腔蛋白單克隆抗體 Calumenin |
小鼠半乳糖凝集素1(Galectin-1)elisa檢測試劑盒 |
干擾素調(diào)節(jié)因子7抗體 IRF7 |
人U型肌酸激酶,線粒體(CKMT1A)elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠碳酸酐酶Ⅸ(CA9)elisa檢測試劑盒 |
細(xì)胞磷酸二酯酶(50042.1)總活性酶連續(xù)循環(huán)光譜法定量檢測試劑盒 |
KB人口腔表皮癌細(xì)胞大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長因子9(bFGF-9)elisa檢測試劑盒 |
大鼠D二聚體(D2D)elisa檢測試劑盒 |
血清蛋白提取試劑盒100T |
小鼠剪接因子3B亞基3(SF3B3)elisa檢測試劑盒 |
體液氧化型甘肽(GSSG)濃度高效液相色譜定量檢測試劑盒 |