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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
RAW 264.7:RAW 2647
1×106
P-X1100
產(chǎn)品詳情：
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞，不用yi酶消化
細(xì)胞形態(tài) 不規(guī)則形
生長(zhǎng)培養(yǎng)基 DMEM＋10% FBS＋1% P/S
凍存條件
凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO
溫度：液氮
培養(yǎng)條件
氣相：空氣，95%；CO2，5%
溫度：37℃
推薦傳代比例 1:6~1:8
推薦換液頻率 2~3次/周
注意事項(xiàng) 1、該細(xì)胞不建議使用yi酶消化，yi酶會(huì)刺激分化； 2、 超過(guò)3天不傳代細(xì)胞容易分化； 3、 培養(yǎng)時(shí)，存在少量分化細(xì)胞，屬于正?，F(xiàn)象。
背景描述 RAW 264.7細(xì)胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；sIg-、Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。RAW 264.7細(xì)胞不分泌可檢測(cè)到的病毒顆粒，XC斑點(diǎn)形成試驗(yàn)陰性。RAW 264.7細(xì)胞可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖，并且可以抗體依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細(xì)胞。LPS或PPD處理2天可誘導(dǎo)RAW 264.7細(xì)胞分解紅血球，但對(duì)腫瘤靶細(xì)胞無(wú)作用。
年齡（性別） 雄性，成年
組織來(lái)源 Abelson鼠科白血病病毒誘導(dǎo)的腫瘤；單核細(xì)胞；巨噬細(xì)胞
細(xì)胞類(lèi)型 腫瘤細(xì)胞
腫瘤類(lèi)型 白血病細(xì)胞
生物等級(jí) 2
倍增時(shí)間 ~12-30小時(shí)
受體表達(dá)情況 complement (C3)
抗原表達(dá)情況 H-2d
基因表達(dá)情況 lysozyme, H-2d; Tested and found negative for ectromelia virus (mousepox).
保藏機(jī)構(gòu) ATCC; TIB-71 ECACC; 91062702
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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磷酸化細(xì)胞骨架肌動(dòng)蛋白樣蛋白3抗體 |
核苷酸結(jié)合蛋白1抗體 |
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phospho-ARP3 (Ser418) |
生精細(xì)胞凋亡相關(guān)基因6抗體 Anti-TSARG6/DNAJB13 |
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熱休克因子結(jié)合蛋白1樣蛋白1抗體 |
Haemophilus influenza |
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HSBP1L1 |
流感嗜血桿菌蛋白抗體 |
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磷酸酯酶-2Ac抗體 Anti-PP2Ac/PP4C |
NUBP1 |
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果糖-2,6-二磷酸酶心肌酶抗體 Anti-PFKFB2 |
HEV Capsid protein |
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S期激酶相關(guān)蛋白1抗體 Anti-SKP1 |
嗅覺(jué)受體5K3抗體 |
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戊型肝炎病毒抗體 |
OR5K3 |
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大鼠Toll樣受體4(TLR4)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
原癌基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體 Anti-YES1 |
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TLR4 ELISA Kit |
蛋白激酶C結(jié)合蛋白NELL2抗體 Anti-NELL2/NRP2 |
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人胱抑素SN(CST1)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
磷酸化急性髓細(xì)胞白血病1蛋白抗體 Anti-phospho-RUNX1/AML1(Ser249) |
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CST1ELISAkit |
跨膜蛋白SEMA3D抗體 Anti-Semaphorin 3D/SEMA3D |
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冰凍切片組織COLLAGEN III蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒 |
通用型牛藍(lán)舌?。?span>Blue Tongue）基因檢測(cè)試劑盒 |
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大鼠腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白6(TSG-6)elisa檢測(cè)試劑盒 |
RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞小鼠白介素17B(IL17B)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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LOC83459蛋白抗體 |
細(xì)胞色素B561結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體 |
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LOC83459 |
CYB561D1 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。