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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號(hào)
T24:T24
1×106
P-X990
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱：T-24; T 24；人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞
種屬來源：人
年齡性別：女，81歲
組織來源：膀胱；移行細(xì)胞癌
生長特性：貼壁生長
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
背景簡介：T24細(xì)胞源自一位81歲白人女性患者的膀胱移行細(xì)胞癌組織；來源于移行細(xì)胞癌病人的白血病和血漿對(duì)T24和相關(guān)細(xì)胞株有細(xì)胞毒性；倍增時(shí)間：為19小時(shí)；含ras(H-ras)癌基因,表達(dá)腫瘤特有抗原。
生物等級(jí)：1
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)：無
基因表達(dá)情況：tumor specific antigen, HLA A1, A3, B18, Bw35, Cw4, DRw2, Dw4
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; HTB-4 DSMZ; ACC-376 ；中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫
培養(yǎng)基：MCCOY'S 5A+10%FBS+PS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
倍增時(shí)間：~20-48 hours
STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X；CSF1PO：10，12；D13S317：12；D16S539：9；D18S51：16，18；D19S433：13，14；D21S11：29；D2S1338：20，23；D3S1358：16；D5S818：10，12；D7S820：10，11；D8S1179：14；FGA：17，22；TH01：6；TPOX：8，11；vWA：17；
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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猴血纖蛋白原降解產(chǎn)物(FDP)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
磷脂酰乙醇胺N-甲基轉(zhuǎn)移酶抗體 PEAMT |
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FDP ELISA kit |
信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子6抗體 STAT6 |
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人肥大細(xì)胞類胰蛋白酶(MCT)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
FBXL3蛋白抗體 FBXL3 |
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MCTELISAKit |
FAM151B蛋白抗體 FAM151B |
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血管活性腸肽抗體 VIP |
錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白40抗體 ANKRD40 |
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膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2抗體 SREBP2 |
胎球蛋白B/Fetuin β抗體 Fetuin beta |
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蛋白磷酸酶3調(diào)節(jié)亞基R2抗體 PPP3R2 |
PE標(biāo)記小鼠CD23單克隆抗體 mouse CD23/PE |
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絲裂原活化蛋白激酶3K10抗體 MAP3K10 |
Rabbit Anti-Acetyl-Histone H3 (Lys18) antibody |
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大鼠層連蛋白/板層素(LN)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
1號(hào)染色體開放閱讀框168抗體 C1orf168 |
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小鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sTRAIL)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞型p55抗體 PSMD12 |
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犬成纖維細(xì)胞生長因子23(FGF23)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1B抗體 CORO1B |
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組織乙醇脫氫酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
甲基樣蛋白16抗體 METT10D |
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豬分泌型球蛋白A(sIgA)elisa檢測(cè)試劑盒 |
燕麥β-葡聚糖含量熒光定量檢測(cè)試劑盒 |
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大鼠胸腺素β-4(TMSB4X)elisa檢測(cè)試劑盒 |
T24人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞小鼠C肽(C-Peptide)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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人存活素抗體/生存蛋白(Surv)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
小鼠血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)elisa檢測(cè)試劑盒 |
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植物磷脂酶D2（Phospholipase D2）活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 |
大鼠可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)elisa檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。