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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
CaSKi:CaSKi
1×106
P-X684
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱：Ca-Ski; CaSki; Caski; CASKI；人宮頸癌上皮細(xì)胞
種屬來源：人
年齡性別：女；40歲
組織來源：；宮頸癌腸轉(zhuǎn)移
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)：上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介：Ca Ski細(xì)胞是從小腸腸系膜轉(zhuǎn)移灶建立的。據(jù)報(bào)道，它含有完整的HPV-16(每個(gè)細(xì)胞大約600個(gè)拷貝)和HPV-18相關(guān)序列?？僧a(chǎn)生hCGβ亞單位、腫瘤相關(guān)抗原。
生物等級(jí)：2
細(xì)胞規(guī)格：1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)：無
基因表達(dá)情況：beta subunit of human chorionic gonadotropin (hCG); tumor associated antigen
保藏機(jī)構(gòu)：ATCC; CRL-1550 ATCC; CRM-CRL-1550 ATCC; CRL-7915 BCRC; 60251 ECACC; 87020501；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心
培養(yǎng)基：90% RPMI-1640+10% FBS+PS
培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件：無血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
倍增時(shí)間：~60-80 hours
STR鑒定位點(diǎn)Amelogenin：X；CSF1PO：10；D13S317：8，12；D16S539：11，12；D18S51：17；D19S433：15，16；D21S11：30；D2S1338：21；D3S1358：15；D5S818：13；D7S820：8，11；D8S1179：15；FGA：21；TH01：7；TPOX：8；vWA：17；
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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LYRM2蛋白抗體 |
胞質(zhì)動(dòng)力蛋白輕鏈中間體1抗體 DNCLI1 |
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LYRM2 |
磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體 Phospho-PKC gamma (Thr514) |
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細(xì)胞角蛋白15重組兔單克隆抗體 |
心肌營養(yǎng)素1抗體 CT-1 |
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Cytokeratin 15 |
線粒體乙?；?span>3抗體 [KO驗(yàn)證抗體] SIRT3 |
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磷酸化緊密連接蛋白6抗體 phospho-Claudin 6 (Tyr219) |
補(bǔ)體因子H重組兔單克隆抗體 CFH |
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CD44v7抗體 CD44v7 |
核轉(zhuǎn)錄因子YB抗體 NFYB |
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CXXC型鋅指蛋白4抗體 CXXC4 |
軸突生長(zhǎng)誘向因子G1/神經(jīng)突起生長(zhǎng)導(dǎo)向因子G1抗體 Netrin-G1 |
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核仁蛋白9抗體 NOL9 |
轉(zhuǎn)錄因子HES-1抗體 HES1 |
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大鼠白介素2可溶性受體β鏈(sIL-2Rβ)elisa檢測(cè)試劑盒 |
少突膠質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子1抗體 OLIG1 |
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小鼠降鈣素(CT)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
神經(jīng)細(xì)胞蠟樣質(zhì)脂褐質(zhì)沉積病蛋白CLN3抗體 CLN3 |
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蘋果酸含量測(cè)試盒 |
MTO1蛋白抗體 MTO1 |
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酵母甘肽過氧化物酶（GSH PX）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
O-唾液酸糖蛋白內(nèi)肽酶抗體 OSGEP |
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脂肪酶（LPS)測(cè)試盒 |
植物葉綠體總蛋白定量檢測(cè)試劑盒 |
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大鼠糖原磷酸化酶工酶II(GP-II)elisa檢測(cè)試劑盒 |
CaSKi人宮頸癌細(xì)胞線粒體呼吸鏈復(fù)合物 Ⅴ 活性測(cè)試盒 20管/10樣 生化法 |
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人補(bǔ)體C1q（C1q）elisa檢測(cè)試劑盒 |
小鼠糖皮質(zhì)受體β(GR-β)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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血液磷酸二酯酶（PDE）總活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 |
大鼠堿性磷酸酶(ALP)elisa檢測(cè)試劑盒 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。