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抗體反應(yīng)特點:
1.高度特異性,特異性是抗原抗體反應(yīng)的主要特征,特定抗原決定簇只與特定抗體結(jié)合;
2.可逆性:抗原與抗體結(jié)合形成抗原抗體復(fù)合物的過程是一種動態(tài)平衡, 其反應(yīng)式為:Ag+AbAg·Ab;
3.適當(dāng)濃度和比例;
4.敏感性:在測定血清中某一物質(zhì)的含量時,化學(xué)比色法的敏感度為mg/ml水平,酶反應(yīng)測定法的敏感度約為5~10μg/ml,定中凝膠擴散法的敏感度與酶反應(yīng)法相仿。
抗體反應(yīng)的因素:
1.電解質(zhì) :抗原抗體特異結(jié)合后,膠體粒便可發(fā)生脫水作用,此時易受電解質(zhì)影響,如有適當(dāng)濃度的電解質(zhì)存在就會使它們失去部分負電荷而相互凝聚,于是出現(xiàn)明顯的凝集或沉淀現(xiàn)象。
2.酸堿度:合適的pH為6-8。
3.溫度:37℃通常是抗原體反應(yīng)溫度。
別 名 WDR80; A16L2_HUMAN; APG16-like 2; ATG16 autophagy related 16-like 2; Atg16l2; Autophagy-related protein 16-2; WD repeat-containing protein 80.
英文名稱 Anti-ATG16L2
中文名稱 自噬體ATG16L2蛋白抗體
濃 度 1mg/1ml
規(guī) 格 0.2ml/200μg
抗體來源 Rabbit
克隆類型 polyclonal
交叉反應(yīng) Human, Mouse
產(chǎn)品類型 一抗
研究領(lǐng)域 腫瘤 **學(xué)
蛋白分子量 predicted molecular weight: 69kDa
性 狀 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human ATG16L2
產(chǎn)品應(yīng)用 WB=1:100-500 ELISA=1:500-1000 IP=1:20-100 IHC-P=1:100-500 IHC-F=1:100-500 IF=1:100-500
亞 型 IgG
本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
抗體的熒光標記法:
(一)基本原理
賴氨酸殘基的游離e-氨基可與FITC(其激發(fā)波長為492nm,發(fā)射光波長為525nm)共價結(jié)合。與FITC結(jié)合的抗體可用為特異性的探針,以測定細胞相應(yīng)抗原的存在。FITC具有很高的量子產(chǎn)量(發(fā)射光與吸收光的比值,0.85)形成的偶聯(lián)物的穩(wěn)定性很好。
(二)儀器和試劑
1.待偶聯(lián)抗體;
2.碳酸氫鈉緩沖液;
3.疊氮鈉;
4.庵氰酸熒光素;
5.電磁攪拌器。
實驗步驟:
1、石蠟切片,常規(guī)脫蠟至水
2、蒸餾水沖洗,pbs 浸泡5 分鐘(如需采用抗原修復(fù),在此步驟后進行)。
3、3%雙氧水去離子水(無色液體)孵育15-20 分鐘,以消除內(nèi)源性過氧物酶活性。
4、滴加試劑A(藍色液體)室溫孵育15-20 分鐘,傾去,勿洗。
5、滴加適當(dāng)比例稀釋的一抗,37℃孵育2-3 小時或4℃過夜。
6、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
7、滴加試劑B(黃色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
8、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
9、滴加試劑C(橙色液體),室溫或37℃孵育15-20 分鐘。
10、PBS 沖洗,3 分鐘3 次。
11、顯色劑顯色(DAB 或AEC)
12、自來水充分沖洗。
13、如果需要,可進行復(fù)染,脫水,透明。
14、選擇適當(dāng)?shù)姆馄瑒┓馄?/span>
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所**的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體的種類:
抗體是在抗原刺激下產(chǎn)生的,體液性抗體由B淋細胞系產(chǎn)生。根據(jù)其化學(xué)結(jié)構(gòu)和抗原的不同可分為IgG、IgM、IgA、 IgE和IgD5種類型.目前對疫球蛋白G、A、M、E了解較多,對D的功能了解較少。
(1) IgG:是血清中濃度大的一類球蛋白,約占疫球蛋白含量的70~80%,50%分布于血漿。機體受到抗原初次刺激后,其產(chǎn)生時間僅次于IgM。在抗體介導(dǎo)的抗感染免中起主要作用。IgG是球蛋白單體,分子量16萬~18萬,可以通過兔的胎盤,但不能通過豬和牛的胎盤。在體內(nèi)可以有效地抵抗**、病毒等微生物侵襲。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中,參與沉淀反應(yīng)、凝集反應(yīng)、補體結(jié)合反應(yīng)和中和反應(yīng)。
(2) IgM:由5個球蛋白單位組成的五聚體,在血清中的含量僅次于IgG,分子量90萬,是體內(nèi)大的球蛋白??乖醮未碳C體后,IgM出現(xiàn)早,在血清中的含量僅次于IgG,主要分布在血管內(nèi),可以通過激活補體發(fā)揮溶菌、溶細胞及中和病毒的作用。因其是五聚體,免作用很強,是IgG的100倍,但由于含量僅為IgG的1/10,且持續(xù)時間短,所以在抗感染疫中不能起主要作用。在體外的血清學(xué)反應(yīng)中,參與凝集反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng)。
(3) IgA:有單體和雙體兩種形式。單體存在于血清中,分子量約為17萬,亦稱為血清型IgA,有**和抗病毒作用。雙體主要存在于外分泌液中,如唾液、淚液、初乳、氣管分泌液,以初乳中的含量高。雙體IgA亦稱為分泌型IgA,由存在于粘膜和組織上的漿細胞產(chǎn)生,分子量40萬,含量較單體高6~8倍,是粘膜的重要防御因素,可以阻止**或病毒吸附于粘膜表面。
(4) IgE:是一種特殊的糖蛋白,為單位體結(jié)構(gòu),分子量19萬,由消化道、呼吸道粘膜固有層及局部結(jié)中的漿細胞所形成,在血清中含量甚微,是一種致敏抗體,容易吸附在**表面,當(dāng)與相應(yīng)抗原結(jié)合所引起過敏反應(yīng)。在機體抵抗**和病毒的感染中幾乎無作用。
β淀粉樣肽(1-42)抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-beta-Amyloid(1-42)
水通道蛋白-7抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-AQP7
ATP5J抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-ATP5J
原癌基因Bcl-6抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-Bcl-6/5
磷酸化乳腺癌易感基因1抗體(人) 規(guī)格: 0.1ml Anti-Phospho-BAP1 (Ser592)
粘附分子相關(guān)蛋白a1抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-CTNNAL1
干生長因子受體/表面分化抗原抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-CD117/c-kit/SCFR
異染色質(zhì)蛋白1-γ抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-HP1 gamma
抗TCD1抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-CD1a/Cortical thymocyte antigen CD1A
CD59抗體 規(guī)格: 0.2ml Anti-CD59
磷酸化分化周期CDC42蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml Anti-Phospho-CDC42 (Ser71)
人羊膜間充質(zhì)基質(zhì)大豆慢生根瘤 Bradyrhizobium japonicum
苜蓿中華根瘤 Sinorhizobium meliloti泡盛曲霉 Aspergillus awamori
枯草芽胞桿 Bacillus subtilis香菇 Lentinula edodes
地衣芽孢桿 Bacillus licheniformisMDA-MB-231(ATCC來源), 人腺
T24, 人膀胱人前列腺成纖維完全培養(yǎng)基
名稱大鼠皮膚肥大完全培養(yǎng)基
大鼠肺成纖維完全培養(yǎng)基100mL
Annexin V-FITC/PI雙染法凋亡檢測試劑盒規(guī)格:
大豆慢生根瘤
釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
自噬體ATG16L2蛋白抗體質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定N(2Hydroxyethyl)aniline,≥98.0%
質(zhì)量規(guī)格:UV法溶出度檢查mAnisidine,97%
質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRDiacetoneAcrylamide,99%
質(zhì)量規(guī)格:含量測定4Isopropylaniline,99%
質(zhì)量規(guī)格:>99%,標準品2,3,5,6Tetrafluoroaniline,97%
質(zhì)量規(guī)格:>99%,BRLAzetidine2carboxylicacid,≥99%
質(zhì)量規(guī)格:含量測定1,1Cyclohexanediaceticacidmonoamide...
質(zhì)量規(guī)格:含量測定3Azetidinecarboxylicacid,98%
質(zhì)量規(guī)格:檢查4,4Diaminoazobenzene,98%
質(zhì)量規(guī)格:供TCL鑒別用Benzophenoneimine,95%
質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定3Azetidinecarboxylicacid,≥90%
質(zhì)量規(guī)格:HPLC法含量測定N(2,4Dimethylphenyl)3oxobutyramide...
質(zhì)量規(guī)格:含量測定3,5Ditertbutylaniline,98%
質(zhì)量規(guī)格:含量測定N′BenzylN,Ndimethylethylenediamine...
質(zhì)量規(guī)格:含量測定4Hydroxyphenylacetamide,95%