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操作步驟:
A:組織中提取
1.收集 0.1g 組織,加入 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑(依據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇),冰上用組織研磨器或勻 漿管研磨。
2.將勻漿后樣品轉(zhuǎn)移至 1.5ml 離心管中,11000rpm 5min,吸棄上清保留沉淀。
3.至步驟 2。
B:細(xì)胞中提取
1.收集約 10 8個(gè)細(xì)胞,3000rpm 5min(懸浮細(xì)胞直接離心,貼壁細(xì)胞使用細(xì)胞刮刀或胰蛋白酶消化離心收集 均可。注意用預(yù)冷 PBS 清洗殘留培養(yǎng)基和胰蛋白酶等),吸棄上清。
2.至步驟 1。
步驟 1:加 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑(依據(jù)實(shí)驗(yàn)選擇),冰上孵育 30min(每 10min 用移液槍 吹打一次),4°C 11000rpm 離心 5min,棄上清。
步驟 2:于上述步驟離心管中加入 200μl Lysis Buffer 2,置于冰上 30min(每 10min 渦旋一次),4°C 11000rpm 離心 5min,吸取上清于一新離心管中。
步驟 3:加入 40μl Balance Buffer 于上述步驟離心管中,用移液槍輕輕吹勻。
步驟 4:使用 BCA 定量試劑盒定量。
步驟 5:于步驟 3 離心管中加入 2.4μl Adjust Buffer,輕輕吹勻,并應(yīng)用于下游研究。
產(chǎn)品簡介:
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
檢測方法 |
適用樣本 |
保存溫度 |
貨號 |
RIPA裂解液 |
100ml |
WB、IP等 |
細(xì)胞、組織 |
2-8℃ |
BH-D85372 |
自備儀器和試劑耗材:
儀器準(zhǔn)備:
1.離心機(jī)
2.振蕩器
3.勻漿機(jī)/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準(zhǔn)備:
1.PBS 緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準(zhǔn)備:
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用方法:
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時(shí)液體灑落。
蛋白酶抑制劑在 2-8℃時(shí)是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時(shí)間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過程須保持樣品處于低溫。本公司產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。
注意事項(xiàng):
1. 正式實(shí)驗(yàn)前請選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn),以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件,取得佳實(shí)驗(yàn)效果。
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時(shí)試劑損失。
3. 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4. 樣品或試劑被污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
5. 好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底殘留清潔劑。
6. 實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
大鼠白細(xì)胞分化抗原44(CD44)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人鉤端螺旋體IgG(Lebtospira)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠血清總補(bǔ)體(CH50)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
神經(jīng)生長因子 48T/96T
人巨噬細(xì)胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
雞乙酰乙酸檢測(ACAC)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠維生素D(VD)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
肌球蛋白 48T/96T
小鼠甲種胎兒球蛋白/甲胎蛋白(AFP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人血栓海綿蛋白(TSP) ELISA試劑盒96T/48試劑盒 組裝/原裝
鵝P450膽固醇側(cè)鏈裂解酶(P450scc)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
RIPA裂解液血管緊張素II抗原 規(guī)格: 0.5mg Ang- II (Angiotensin II )
水通道蛋白-3抗原 規(guī)格: 0.5mg AQP3(aquaporin 3)
精氨酸加壓素受體2抗原 規(guī)格: 0.5mg AVPR2(arginine vasopressin receptor 2)
人胎盤生長因子(多肽抗原) 規(guī)格: 0.5mg PLGF (Placenta growth factor fragment)(human)
半胱胺酸蛋白酶蛋白-12抗原(人) 規(guī)格: 0.5mg Caspase-12(hunman)
CD10抗原 規(guī)格: 0.5mg CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase)
二氫嘧啶酶樣2CRMP2抗原 規(guī)格: 0.5mg CRMP2/Dpysl2(collapsin response mediator protein-2)
周期素依賴性激酶8抗原 規(guī)格: 0.5mg CDK8(Cyclin Dependent Kinase 8)
蓬亂蛋白1 規(guī)格: 0.5mg DVL1 (dishevelled 1)
腦型脂肪酸結(jié)合蛋白抗原 規(guī)格: 0.5mg FABP(brain) (Fatty acid-binding protein brain)
生長因子受體結(jié)合蛋白2抗原 規(guī)格: 0.5mg GRB2/ASH peptide
Phytagel plantcell 植物凝膠 100g 瓶
HPD722大孔吸附樹脂 500g 瓶
Rooting Powder 生根粉 100g 瓶
D-Sorbitol D-山梨醇 1kg 瓶
Sudan IV 蘇丹 Ⅳ 25g 瓶
Tylosin 泰樂素 5g 瓶
γ-Globulins from bovine blood γ-球蛋白 1g 瓶
Beef Extract膏 500g 瓶
丙烯酰胺溶液(49.5%T,6%C) 100ml 瓶
羊抗兔IgG(血清) 5ml 支