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操作步驟:
A:組織中提取
1.收集 0.1g 組織,加入 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑(依據(jù)實驗選擇),冰上用組織研磨器或勻 漿管研磨。
2.將勻漿后樣品轉(zhuǎn)移至 1.5ml 離心管中,11000rpm 5min,吸棄上清保留沉淀。
3.至步驟 2。
B:細胞中提取
1.收集約 10 8個細胞,3000rpm 5min(懸浮細胞直接離心,貼壁細胞使用細胞刮刀或胰蛋白酶消化離心收集 均可。注意用預(yù)冷 PBS 清洗殘留培養(yǎng)基和胰蛋白酶等),吸棄上清。
2.至步驟 1。
步驟 1:加 1.0ml Lysis Buffer 1 及適量蛋白酶抑制劑(依據(jù)實驗選擇),冰上孵育 30min(每 10min 用移液槍 吹打一次),4°C 11000rpm 離心 5min,棄上清。
步驟 2:于上述步驟離心管中加入 200μl Lysis Buffer 2,置于冰上 30min(每 10min 渦旋一次),4°C 11000rpm 離心 5min,吸取上清于一新離心管中。
步驟 3:加入 40μl Balance Buffer 于上述步驟離心管中,用移液槍輕輕吹勻。
步驟 4:使用 BCA 定量試劑盒定量。
步驟 5:于步驟 3 離心管中加入 2.4μl Adjust Buffer,輕輕吹勻,并應(yīng)用于下游研究。
產(chǎn)品簡介:
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
檢測方法 |
適用樣本 |
保存溫度 |
貨號 |
酸性蛋白酶抑制劑 |
1ml |
|
蛋白 |
-20℃保存 |
BH-D85396 |
自備儀器和試劑耗材:
儀器準備:
1.離心機
2.振蕩器
3.勻漿機/勻漿器
4.渦旋混勻器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
試劑準備:
1.PBS 緩沖液
2.蛋白定量試劑盒
耗材準備:
1.離心管
2.吸頭
3.一次性手套
使用方法:
旋帽離心管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底,避免開蓋時液體灑落。
蛋白酶抑制劑在 2-8℃時是固體狀態(tài),從冰箱取出后恢復(fù)至室溫或 37℃短時間水浴,變成液體狀態(tài)后離心至管底部再開蓋。
實驗過程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個過程須保持樣品處于低溫。本公司產(chǎn)品僅用于科研實驗。
注意事項:
1. 正式實驗前請選取幾個樣本做預(yù)實驗,以優(yōu)化實驗條件,取得佳實驗效果。
2. 螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3. 禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4. 樣品或試劑被污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。
5. 好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并徹底殘留清潔劑。
6. 實驗后完成后所有樣品及接觸過的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。
人17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抑制酸性蛋白(IAP)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
胱天蛋白酶7 48T/96T
豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體(VE-cad)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
孤啡肽 48T/96T
人D二聚體(D2D)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠高敏三碘甲狀腺原氨酸(u-T3)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人抑瘤素M(OSM)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
大鼠TNF-B酶聯(lián)分析ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
酸性蛋白酶抑制劑熒光素標記兔抗人、大、小鼠、豬、牛、羊、犬白介素-1受體拮抗劑抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-IL-1RA (Interleukin-1 receptor antagonist) /FITC
熒光素標記白介素-12受體β2抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-IL-12R Beta2/FITC
熒光素標記胰島素樣生長因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白3抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-IMP3/FITC
熒光素標記胰島素受體抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-ISR/FITC
熒光素標記激肽釋放酶10抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-KLK10/FITC
熒光素標記磷酸化特異性蛋白酪氨酸激酶抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-Phospho-Lck (Tyr505) /FITC
熒光素標記絲裂原活化蛋白激酶3抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-ERK1/MAPK3/FITC
熒光素標記組織胺H4受體抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-HRH4/GPCR105/FITC
熒光素標記MEK1/ MAPKK 1抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-MEK1/ MAPKK 1/FITC
熒光素標記磷酸化肌球蛋白磷酸酶抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-Phospho-MYPT1 (Thr853) /FITC
熒光素標記有絲分裂原和應(yīng)激活化型蛋白激酶1抗體IgG 規(guī)格: 0.2ml Anti-MSK1/FITC
RNase A 25mg 瓶
Proteinase K 蛋白酶 K 100mg 瓶
RNase A溶液 (10mg/ml) 1ml 瓶
Proteinase K 蛋白酶 K(原裝) 100mg 瓶
蛋白酶 K溶液(10mg/ml) 1ml 瓶
酚:仿:異戊醇 125:24:1(pH<5.0) 100ml 瓶
兔抗IgG 1mg 支
高速增感屏 5×7 盒
胎牛血清 新西蘭 500ml 瓶
Ionomycin calcium salt 鈣離子霉素 1mg 瓶