產(chǎn)品名稱：霍亂弧菌CTX基因熒光PCR檢測試劑盒

貨號：BH-P64478
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。

它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，靈敏性高。
3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高，引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。

實(shí)驗(yàn)方法步驟：

方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（*好用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Ai-TLR5/CD285 /FITC 熒光su標(biāo)記Toll樣受體5抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Nurr1 核受體相關(guān)因子-1(抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg

轉(zhuǎn)移生長因子–β1抗體 Ai-TGF-β1 0.1ml

phospho-SLK (Tyr530) 英文名稱： 磷suan化酪suan蛋白激meiFyn/同步原癌基因抗體 0.1ml

Phospho-EGFR (Ser991) 英文名稱： 磷suan化表皮生長因子受體抗體 0.1ml

Rhesus aibody Rh phospho-LATS2 (Ser83) 磷suan化抑制基因LATS2抗體  0.1ml

Nurr1 核受體相關(guān)因子-1(抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg

Peptide YY 酪酪肽多肽(1-36)Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-Bassoon 鋅指蛋白231抗體Multi-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-5-Lipoxygenase(Ser271) 磷suan化5-脂氧合mei抗體  0.1ml

Keratin17 濃縮液 0.1ml 進(jìn)口分裝

UBE2V1 英文名稱： 泛su結(jié)合meiE2變異體1抗體 0.2ml

CHSS2 英文名稱： 軟骨sumei2抗體 0.1ml

Ai-Bassoon 鋅指蛋白231抗體Multi-class aibodies： 0.2ml

Phospho-Syk (Tyr525 + Tyr526) 英文名稱： 磷suan化非受體型酪suan蛋白激mei抗體 0.1ml

E2F7 英文名稱： 轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子E2F7抗體 0.2ml

分泌型卷曲相關(guān)蛋白1抗體 ai-SFRP1 0.2ml

Ai-TCF7L2/FITC 熒光su標(biāo)記轉(zhuǎn)錄因子7類似物2抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-MEF2A (Thr312) 磷suan化肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2抗體  0.1ml

Leptin 瘦su(多肽抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg

霍亂弧菌CTX基因熒光PCR檢測試劑盒高suan鈉(AR)青霉su一步法PCR反應(yīng)液

硫suan亞鐵七水(AR)絲裂霉su超白金TAG DNA聚合mei

磷suan三乙酰苯三磷suan脫氧核糖核suan（dPs）混合液

鈣黃綠su二鈉鹽青霉sumei一步法平端PCR反應(yīng)液

植suan鈉咪唑試劑一步法熒光定量PCR反應(yīng)液

乙二乙suan鐵鈉鹽對乙酰氨基苯甲基因甲基化特異性PCR擴(kuò)增（MSP）試劑盒

菊粉;菊糖庚烷磺suan鈉大量總RNA氯化銫純化試劑盒

三氯化鐵,六水(AR)3-乙氧基-4-羥基苯甲全血總RNA純化試劑盒

注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。