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PCR定量試劑盒DNA提取方式

日期:2024-11-25 05:03
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摘要:
    可采用PCR定量試劑盒配備的DNA抽提液,按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購北京百奧萊博科技有限公司生產(chǎn)的(DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品,并按照相應(yīng)試劑盒說明進行操作。

    血液樣本:直接取200μl 抗凝血,轉(zhuǎn)至一潔凈的1.5ml 離心管中,加入1ml 雙蒸水,劇烈震蕩30s,8000rpm 離心5min,棄上清,至無明顯紅色沉淀。(若沉淀明顯,請再重復上述步驟一次)。加入1ml生理鹽水,劇烈震蕩15s,13000rpm 離心5min,棄上清。沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前請室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻,100℃恒溫10min,13000rpm 離心3min,取上清4μl 進行PCR 反應(yīng)。

    肺、**結(jié)等固體組織:剪取約0.1g 組織,用生理鹽水洗去血污,剪碎加入0.5mL TE 轉(zhuǎn)移到勻漿器中勻漿。將勻漿液50μl 轉(zhuǎn)移到1.5mL 離心管中,加入50μl 核酸提取液(使用前請室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻,100℃恒溫10min,13000rpm 離心3min,取上清4μl 進行PCR 反應(yīng)。

    乳液等液體標本:取標本2-3mL,13000rpm 離心3min,棄上清,沉淀加入50μl 核酸提取液(使用前請室溫溶解并充分混勻)并與沉淀混勻,100℃恒溫10min,13000rpm 離心3min,取上清4μl進行PCR反應(yīng)。

  ?注:陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取),直接取5μL加入到反應(yīng)體系中即可。由于陽性對照濃度較高,建議*后在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。

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