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PCR反應(yīng)?陰性對(duì)照出現(xiàn)明顯擴(kuò)增分析
日期：2024-11-25 03:02
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摘要：
PCR反應(yīng)陰性對(duì)照出現(xiàn)明顯擴(kuò)增
1、 反應(yīng)體系組分（如水）被污染：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，更換新的Mix或者水重復(fù)實(shí)驗(yàn)。
2、 標(biāo)本間的交叉污染或產(chǎn)物污染：反應(yīng)體系在超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行嚴(yán)格的區(qū)分，減少氣溶膠污染；使用帶濾芯的槍頭。
3、 引物二聚體的出現(xiàn)：引物設(shè)計(jì)不夠優(yōu)化：應(yīng)避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。
4、引物濃度不佳：適當(dāng)降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。在35循環(huán)后陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增屬正常情況，可配合熔解曲線進(jìn)行分析。
PCR反應(yīng)陰性對(duì)照出現(xiàn)明顯擴(kuò)增
2、 標(biāo)本間的交叉污染或產(chǎn)物污染：反應(yīng)體系在超凈工作臺(tái)內(nèi)配制，對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行嚴(yán)格的區(qū)分，減少氣溶膠污染；使用帶濾芯的槍頭。
3、 引物二聚體的出現(xiàn)：引物設(shè)計(jì)不夠優(yōu)化：應(yīng)避免引物二聚體和發(fā)夾結(jié)構(gòu)的出現(xiàn)。
4、引物濃度不佳：適當(dāng)降低引物的濃度，并注意上下游引物的濃度配比。在35循環(huán)后陰性對(duì)照出現(xiàn)擴(kuò)增屬正常情況，可配合熔解曲線進(jìn)行分析。