PCR反應(yīng)內(nèi)參基因的三大作用：

1. 樣品提取質(zhì)量的判斷標(biāo)準(zhǔn)

在PCR實驗中，內(nèi)參基因首先作為判斷樣品提取是否成功的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)使用逆轉(zhuǎn)錄得到的cDNA進(jìn)行PCR實驗時，如果結(jié)果為陰性，不能直接得出樣品中沒有目的基因的結(jié)論。只有當(dāng)內(nèi)參基因的CT值處于一個合理的范圍內(nèi)，例如20左右，我們才能確信樣品制備沒有問題，從而確保實驗結(jié)果的可靠性。

2. 目的基因表達(dá)量的計算基礎(chǔ)

在進(jìn)行相對定量PCR時，內(nèi)參基因是計算目的基因表達(dá)量的基礎(chǔ)。由于每個樣品的提取效率可能存在差異，直接比較不同樣品的CT值是沒有意義的。只有將目的基因的表達(dá)量與內(nèi)參基因的表達(dá)量進(jìn)行校正后，得到的比值才具有可比性。這個比值可以量化，轉(zhuǎn)化為表達(dá)量的RQ值，為基因表達(dá)的定量分析提供了準(zhǔn)確依據(jù)。

3. 熔解曲線分析的重要參考

內(nèi)參基因的CT值也是分析熔解曲線的重要參考。當(dāng)qPCR的熔解曲線出現(xiàn)非單峰現(xiàn)象時，除了考慮引物設(shè)計的問題外，還應(yīng)檢查內(nèi)參基因的CT值。如果內(nèi)參基因的CT值過高，如超過30，同時目的基因的CT值也很大，接近40，這可能意味著模板濃度過低，增加了非特異性擴(kuò)增的風(fēng)險，導(dǎo)致目的片段含量不足。這時，需要重新制備PCR模板以確保實驗的準(zhǔn)確性。

內(nèi)參基因在PCR實驗中扮演著至關(guān)重要的角色。它不僅是判斷樣品提取質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)，也是計算目的基因表達(dá)量的基礎(chǔ)，并且在分析熔解曲線時提供了重要參考。正確理解和運用內(nèi)參基因，將大大提高PCR實驗的準(zhǔn)確性和可靠性，為分子生物學(xué)研究提供堅實的數(shù)據(jù)支持。