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PCR定量試劑盒的注意事項(xiàng)介紹
日期：2024-11-25 04:38
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摘要：
PCR定量試劑盒的注意事項(xiàng)
由于本品檢測(cè)靈敏度極高，即使空氣中微量的DNA氣溶膠都可以引起污染，進(jìn)而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。因此反應(yīng)體系配制時(shí)請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，配制過程中請(qǐng)使用干凈**槍頭、反應(yīng)管，條件容許的實(shí)驗(yàn)室推薦使用專用的移液槍，避免交叉污染;
由于本品中含有熒光染料SYBRGreen I，因此無論保存還是配置反應(yīng)體系時(shí)都應(yīng)該盡量避免強(qiáng)光照射;
本產(chǎn)品中不含用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差的Rox ReferenceDye，客戶可根據(jù)qPCR儀器技術(shù)指導(dǎo)決定是否需要加ROX內(nèi)參染料，用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差;
建議在冰上配制PCR反應(yīng)液，再放入PCR儀器中擴(kuò)增。可以提高擴(kuò)增特異性，減少背景;
模板DNA：用本產(chǎn)品，cDNA、基因組DNA、質(zhì)粒DNA、病毒DNA等都可作為模板。在添加DNA模板時(shí)請(qǐng)注意模板量對(duì)PCR擴(kuò)增的影響。本產(chǎn)品建議添加量為：
cDNA添加量不應(yīng)超過總反應(yīng)體系的10%；基因組DNA為模板時(shí)，為避免在高濃度區(qū)域出現(xiàn)線性差的情況，請(qǐng)注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作為PCR模板，添加時(shí)請(qǐng)以300ng為上限；由于質(zhì)粒DNA濃度和拷貝數(shù)很高，在添加PCR模板之前*好進(jìn)行稀釋梯度試驗(yàn)，以便確定合適的質(zhì)粒DNA拷貝數(shù)。
由于本品檢測(cè)靈敏度極高，即使空氣中微量的DNA氣溶膠都可以引起污染，進(jìn)而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。因此反應(yīng)體系配制時(shí)請(qǐng)于超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，配制過程中請(qǐng)使用干凈**槍頭、反應(yīng)管，條件容許的實(shí)驗(yàn)室推薦使用專用的移液槍，避免交叉污染;
由于本品中含有熒光染料SYBRGreen I，因此無論保存還是配置反應(yīng)體系時(shí)都應(yīng)該盡量避免強(qiáng)光照射;
本產(chǎn)品中不含用以校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差的Rox ReferenceDye，客戶可根據(jù)qPCR儀器技術(shù)指導(dǎo)決定是否需要加ROX內(nèi)參染料，用于消除信號(hào)本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號(hào)誤差;
建議在冰上配制PCR反應(yīng)液，再放入PCR儀器中擴(kuò)增。可以提高擴(kuò)增特異性，減少背景;
模板DNA：用本產(chǎn)品，cDNA、基因組DNA、質(zhì)粒DNA、病毒DNA等都可作為模板。在添加DNA模板時(shí)請(qǐng)注意模板量對(duì)PCR擴(kuò)增的影響。本產(chǎn)品建議添加量為：
cDNA添加量不應(yīng)超過總反應(yīng)體系的10%；基因組DNA為模板時(shí)，為避免在高濃度區(qū)域出現(xiàn)線性差的情況，請(qǐng)注意添加量小于500ng；病毒DNA也可作為PCR模板，添加時(shí)請(qǐng)以300ng為上限；由于質(zhì)粒DNA濃度和拷貝數(shù)很高，在添加PCR模板之前*好進(jìn)行稀釋梯度試驗(yàn)，以便確定合適的質(zhì)粒DNA拷貝數(shù)。
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