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PCR技術(shù)RNA提取流程
日期：2024-11-25 02:02
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摘要：
RNA的提取是參照全式金生物的Transzol up提取試劑盒完成的。
1、離心機(jī)4℃預(yù)冷，準(zhǔn)備試劑：氯仿、異內(nèi)醇、75%乙醇（用DEPC水配制）、無RNase的水或DEPC水、無酶吸頭及試管，戴口罩、帽子、無粉乳膠手套；
2、取出轉(zhuǎn)染建模成功24h后的細(xì)胞，吸棄培養(yǎng)液，用1×PBS清洗1次；
3、每10cm2生長的細(xì)胞加入1mL的Transzol Up, 放置片刻后使用移液槍吹打細(xì)胞使其完全脫落；
4、用移液槍反復(fù)吹吸裂解液直至無明顯沉淀，將裂解液全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)記好的1.5mL EP管中，室溫靜置5min；
5、往每個EP管中加0.2mL氯...
RNA的提取是參照全式金生物的Transzol up提取試劑盒完成的。
1、離心機(jī)4℃預(yù)冷，準(zhǔn)備試劑：氯仿、異內(nèi)醇、75%乙醇（用DEPC水配制）、無RNase的水或DEPC水、無酶吸頭及試管，戴口罩、帽子、無粉乳膠手套；
2、取出轉(zhuǎn)染建模成功24h后的細(xì)胞，吸棄培養(yǎng)液，用1×PBS清洗1次；
3、每10cm2生長的細(xì)胞加入1mL的Transzol Up, 放置片刻后使用移液槍吹打細(xì)胞使其完全脫落；
4、用移液槍反復(fù)吹吸裂解液直至無明顯沉淀，將裂解液全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)記好的1.5mL EP管中，室溫靜置5min；
5、往每個EP管中加0.2mL氯仿（Transzol Up體積的1/5），混勻振蕩30s，室溫靜置3min；
6、4℃條件下10000g離心15min，離心后RNA主要分布在上層水相中，體積約50%；
7、轉(zhuǎn)移上層水相于新的EP管中（約400μL，注意不要吸取到下層），每管加入0.5mL異丙醇 （Transzol Up體積的1/2），顛倒混勻，室溫孵育10min；
8、4℃下10000g離心10min后在管側(cè)和管底形成膠狀沉淀，吸棄上清，加1mL 75%乙醇吹懸沉淀；
9、4℃下7500g離心5min后棄上清，盡量吸凈，室溫晾干沉淀5min，依細(xì)胞量加入30~100μL的RNA溶解液；
10、55℃~60℃金屬浴10min，-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?