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小鼠ELISA試劑盒離心方法簡(jiǎn)介

日期:2024-11-25 01:44
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摘要: 小鼠ELISA試劑盒離心方法簡(jiǎn)介 一、差速離心法 它利用不同的粒子在離心力場(chǎng)中沉降的差別,在同一離心條件下,沉降速度不同,通過不斷增加相對(duì)離心力,使一個(gè)非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。操作過程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開,然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心,分離出第2部分沉淀,如此往復(fù)加高轉(zhuǎn)速,逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)差速離心的分辨率不高,沉淀系數(shù)在同一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)的各種粒子不容易分開,常用于其他分離手段之前的粗制品提取 二、速率區(qū)帶離心法 速率區(qū)帶離...

小鼠ELISA試劑盒離心方法簡(jiǎn)介

一、差速離心法

它利用不同的粒子在離心力場(chǎng)中沉降的差別,在同一離心條件下,沉降速度不同,通過不斷增加相對(duì)離心力,使一個(gè)非均勻混合液內(nèi)的大小、形狀不同的粒子分部沉淀。操作過程中一般是在離心后用傾倒的辦法把上清液與沉淀分開,然后將上清液加高轉(zhuǎn)速離心,分離出第2部分沉淀,如此往復(fù)加高轉(zhuǎn)速,逐級(jí)分離出所需要的物質(zhì)差速離心的分辨率不高,沉淀系數(shù)在同一個(gè)數(shù)量級(jí)內(nèi)的各種粒子不容易分開,常用于其他分離手段之前的粗制品提取

二、速率區(qū)帶離心法

速率區(qū)帶離心法是在離心前于離心管內(nèi)先裝入密度梯度介質(zhì)(如蔗糖、甘油、KBr、CsCl等),待分離的樣品鋪在梯度液的頂部、離心管底部或梯度層中間,同梯度液一起離心。離心后在近旋轉(zhuǎn)軸處(X 1 )的介質(zhì)密度小,離旋轉(zhuǎn)軸遠(yuǎn)處(X 2 )介質(zhì)的密度大,但大介質(zhì)密度必須小于樣品中粒子的小密度,即ρ P >ρ m 。這種方法是根據(jù)分離的粒子在梯度液中沉降速度的不同,使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內(nèi)分成一系列區(qū)帶,達(dá)到彼此分離的目的。梯度液在離心過程中以及離心完畢后,取樣時(shí)起著支持介質(zhì)和穩(wěn)定劑的作用,避免因機(jī)械振動(dòng)而引起已分層的粒子再混合。

由于ρ P >ρ m 可知S>0,因此該離心法的離心時(shí)間要嚴(yán)格控制,既有足夠的時(shí)間使各種粒子在介質(zhì)梯度中形成區(qū)帶,又要控制在任一粒子達(dá)到沉淀前。如果離心時(shí)間過長,所有的樣品可全部到達(dá)離心管底部;離心時(shí)間不足,樣品還沒有分離。由于此法是一種不完全的沉降,沉降受物質(zhì)本身大小的影響較大,一般是應(yīng)用在物質(zhì)大小相異而密度相同的情況。常用的梯度液有Ficoll、Percoll及蔗糖。

三、等密度離心法

等密度離心法是在離心前預(yù)先配制介質(zhì)的密度梯度,此種密度梯度液包含了被分離樣品中所有粒子的密度,待分離的樣品鋪在梯度液頂上或和梯度液先混合,離心開始后,當(dāng)梯度液由于離心力的作用逐漸形成底濃而管頂稀的密度梯度,與此同時(shí)原來分布均勻的粒子也發(fā)生重新分布。當(dāng)管底介質(zhì)的密度大于粒子的密度,即ρ m >ρ P 時(shí)粒子上浮;在彎頂處ρ P >ρ m 時(shí),則粒子沉降,后粒子進(jìn)入到一個(gè)它本身的密度位置即ρ P =ρ m ,此時(shí)dx/dt為零粒子不再移動(dòng),粒子形成純組份的區(qū)帶,與樣品粒子的密度有關(guān),而與粒子的大小和其他參數(shù)無關(guān),因此只要轉(zhuǎn)速、溫度不變,則延長離心時(shí)間也不能改變這些粒子的成帶位置。