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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
50T流感病毒N8亞型PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63222 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號(hào)管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 5 號(hào)管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號(hào)管中取 5 μL 溶液到 4 號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號(hào)管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
著絲粒蛋白B(CENP-B)ELISA試劑盒 CENP-B ELISA Kit 脂肪組織分化相關(guān)蛋白抗體英文名稱:ADFP 0.1ml
長效甲狀腺刺(LATS)ELISA試劑盒 LATS ELISA Kit 脂聯(lián)素受體1抗體英文名稱:Adiponectin Receptor 1 0.2ml
張力蛋白4(TNS4)ELISA試劑盒 TNS4 ELISA Kit 腎上腺髓質(zhì)素受體抗體英文名稱:ADM R 0.1ml
粘膜相關(guān)上皮趨化因子(MEC/CCL28)ELISA試劑盒 MEC/CCL28 ELISA Kit 脂聯(lián)素抗體英文名稱:Adiponectin 0.1ml
粘蛋白3(MUC3)ELISA試劑盒 MUC3 ELISA Kit 腎上腺髓質(zhì)素抗體英文名稱:ADM 0.1ml
粘蛋白2(MUC2)ELISA試劑盒 MUC2 ELISA Kit 腺苷受體A3抗體英文名稱:Adenosine A3 Receptor 0.1ml
粘蛋白/粘液素7(MUC7)ELISA試劑盒 MUC7 ELISA Kit ADRA2腎上腺素能受體2抗體英文名稱:ADRA2 0.1ml
粘蛋白/粘液素5B(MUC5B)ELISA試劑盒 MUC5B ELISA Kit 腎上腺素能受體β1抗體英文名稱:ADRB1 0.1ml
粘蛋白/粘液素5AC(MUC5AC)ELISA試劑盒 MUC5AC ELISA Kit 腎上腺素能受體β2/β2-AR抗體英文名稱:ADRB2 0.1ml
增殖誘導(dǎo)配體(APRIL)ELISA試劑盒 APRIL ELISA Kit 晚期糖基化終末產(chǎn)物抗體英文名稱:AGEs 0.1ml
早期生長反應(yīng)因子1(EGR1)ELISA試劑盒 EGR1 ELISA Kit 軟骨蛋白聚糖抗體英文名稱:Aggrecan1 0.1ml
早期前列腺癌抗原2(EPCA2)ELISA試劑盒 EPCA2 ELISA Kit 5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體英文名稱:ALAS-E 0.2ml
早期活化抗原CD69(CD69)ELISA試劑盒 CD69 ELISA Kit p53凋亡刺激蛋白1抗體英文名稱:ASPP1 0.1ml
早老素1(PS-1)ELISA試劑盒 PS-1 ELISA Kit 激活素受體2B抗體英文名稱:ARIP2B 0.2ml
早老素2(PS-2)ELISA試劑盒 PS-2 ELISA Kit P53凋亡刺激蛋白2抗體英文名稱:ASPP2 0.1ml
50T流感病毒N8亞型PCR檢測試劑盒檳榔堿 Arecoline hydrobromide 300-08-3 20mg
小檗堿 Berberine 2086-83-1 20mg
鹽酸小檗堿 Berberine hydrochloride 633-65-8 20mg
表小檗堿 Epiberberine 1816598 20mg
二氫小檗堿 Canadine 483-15-8 20mg
四氫小檗堿 Tetrahydroberberine 522-97-4 20mg
黃連堿 Coptisine 3486-66-6 20mg
鹽酸黃連堿 Coptisine chloride 6020-18-4 20mg
甲基黃連堿 Worenine chloride 38763-29-0 10mg
α-菠甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷 α-spinasteryl-3-O-β-D-glucoside 5mg
扁塑藤素 Pristimerin 1258-84-0 20mg
紫杉醇 Paclitaxel 33069-62-4 20mg
三尖杉寧堿 Cephalomannine 71610-00-9 20mg