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服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T貓皰疹病毒(FHV)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P63926 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
Cullin2蛋白(CUL2)ELISA試劑盒 CUL2 ELISA Kit 瘦素受體抗體英文名稱:Leptin receptor 0.1ml
Cullin1蛋白(CUL1)ELISA試劑盒 CUL1 ELISA Kit 瘦素受體抗體(長)英文名稱:Leptin receptor(long) 0.1ml
CUB帶狀瘡疹透明區(qū)樣域蛋白1(CUZD1)ELISA試劑盒 CUZD1 ELISA Kit 晚期包膜蛋白1抗體英文名稱:LCE1A 0.2ml
CTD磷酸酶1(CTDP1)ELISA試劑盒 CTDP1 ELISA Kit 富含亮氨酸樣酸性核蛋白抗體英文名稱:LANPL 0.2ml
CREB調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄輔激活因子3(CRTC3)ELISA試劑盒 CRTC3 ELISA Kit 晚期包膜蛋白2B抗體英文名稱:LCE2B 0.2ml
CREB結(jié)合蛋白(CREBBP)ELISA試劑盒 CREBBP ELISA Kit 脂肪酶家庭成員K抗體英文名稱:LIPK 0.2ml
CREB/ATFBZIP轉(zhuǎn)錄因子(CREBZF)ELISA試劑盒 CREBZF ELISA Kit 白血病相關(guān)蛋白18/癌蛋白18抗體英文名稱:Stathmin 0.1ml
C-Raf原癌基因絲蘇氨酸蛋白激酶(CRAF)ELISA試劑盒 CRAF ELISA Kit 無腦回的致病基因LIS1抗體英文名稱:LIS1 0.2ml
Cornulin蛋白(CRNN)ELISA試劑盒 CRNN ELISA Kit 溶酶體相關(guān)膜蛋白3抗體英文名稱:LAMP3 0.1ml
Corin蛋白(CRN)ELISA試劑盒 CRN ELISA Kit 亮氨酸腦啡肽抗體英文名稱:L-ENK 0.1ml
CopineⅨ蛋白(CPNE9)ELISA試劑盒 CPNE9 ELISA Kit 自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體英文名稱:LC3B/MAP LC3β/MAP1A 0.1ml
CopineⅧ蛋白(CPNE8)ELISA試劑盒 CPNE8 ELISA Kit 指甲髕骨綜合征相關(guān)蛋白NPS1抗體英文名稱:LMX1b 0.2ml
CopineⅦ蛋白(CPNE7)ELISA試劑盒 CPNE7 ELISA Kit 自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈β3抗體英文名稱:LC3B 0.1ml
CopineⅣ蛋白(CPNE4)ELISA試劑盒 CPNE4 ELISA Kit LRRC41蛋白抗體英文名稱:LRRC41 0.2ml
CopineⅤ蛋白(CPNE5)ELISA試劑盒 CPNE5 ELISA Kit LRRC59蛋白抗體英文名稱:LRRC59 0.2ml
50T貓皰疹病毒(FHV)PCR檢測試劑盒250mL FCS Blocking Buffer in PBS FCS Blocking Buffer in PBS 常溫保存
50mL Ferrous Sulfate Solution(硫酸鐵溶液),0.5M Ferrous Sulfate Solution,0.5M 常溫保存
250mL Formalin Solution in Phosphate Buffer,10% Formalin Solution in Phosphate Buffer,10% 常溫保存
250mL Formalin-Acetic Acid Solution Formalin-Acetic Acid Solution 常溫保存
250mL Formalin-Sodium Acetate Solution Formalin-Sodium Acetate Solution 常溫保存
250mL Formalin-Zinc Acetate Solution Formalin-Zinc Acetate Solution 常溫保存
250mL Formalin-Zinc Solution Formalin-Zinc Solution 常溫保存
250mL Galactose Solution(半乳糖溶液),20%(W/V) Galactose Solution,20%(W/V) 常溫保存
500mL Gelatin Blocking Buffer in PBS Gelatin Blocking Buffer in PBS 常溫保存
500mL Gelatin Blocking Buffer in PBS with azide Gelatin Blocking Buffer in PBS with azide 常溫保存
500mL Gelatin Blocking Buffer in TBS Gelatin Blocking Buffer in TBS 常溫保存
500mL Gelatin Blocking Buffer in TBS with azide Gelatin Blocking Buffer in TBS with azide 常溫保存
125mL Gelatin Solution,10% Gelatin Solution,10% 常溫保存
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。