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它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50TQ熱立克次(CB)體PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P64040 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個(gè)稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個(gè)樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個(gè)陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。
轉(zhuǎn)錄因子RPF1抗體英文名稱:POU6F2 0.2ml
蛋白磷酸酶2A抑制劑1抗體英文名稱:PHAP1 0.2ml
橋粒相關(guān)蛋白DRS抗體英文名稱:Pinin 0.2ml
抑癌蛋白DLP1抗體英文名稱:PDSS2 0.2ml
蛋白激酶C delta結(jié)合蛋白抗體英文名稱:PRKCDBP 0.2ml
鴨甲型肝炎病毒聚蛋白抗體英文名稱:duck hepatitis A virus polyprotein 1ml
前列腺素E2抗體英文名稱:PGE2 0.1ml
多效生長因子抗體英文名稱:Pleiotrophin 0.1ml
轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子MAZR抗體英文名稱:PATZ1 0.2ml
凋亡相關(guān)蛋白6抗體英文名稱:PDCD6 0.2ml
PSD95相關(guān)緊密連接蛋白PATJ抗體英文名稱:PATJ 0.2ml
血小板源性生長因子AA+BB抗體英文名稱:PDGFAA + PDGFBB 0.1ml
前列腺素EP1受體抗體英文名稱:PTGER1 0.1ml
酸性核磷蛋白32家族B抗體英文名稱:PHAPI2 0.2ml
脯氨酸水解酶4抗體英文名稱:P4HTM 0.1ml
50TQ熱立克次(CB)體PCR檢測試劑盒環(huán)絲氨酸 每支含環(huán)絲氨酸40mg,添加于100mL胰月示-亞硫酸鹽-環(huán)絲氨酸瓊脂基礎(chǔ)(TSC)中 10支/盒
環(huán)氧乙烷/干熱滅芽孢條 用于監(jiān)視干熱滅效果的常規(guī)性芽孢紙條生物指示劑 100支/盒
環(huán)氧乙烷滅指示條 當(dāng)暴露于高于10kGy劑量的γ輻射中時(shí),γ射線指示標(biāo)簽由黃色變?yōu)榧t色。 1500片/卷
緩沖蛋白胨水 用于沙門氏和阪崎腸桿的前增培養(yǎng)。 225mlX6瓶
緩沖蛋白胨水 用于食品中沙門氏、阪崎腸桿的前增培養(yǎng)。 9mlX20支
緩沖蛋白胨水 用于食品中沙門氏、阪崎腸桿的前增培養(yǎng)。 225ml/X10袋
緩沖蛋白胨水(緩沖胨水增液) (BPW) 用于沙門氏的前增培養(yǎng)(GB4789.4-2010 ,GB4789.40-2010,SN0170-92和GB13091-91,ISO標(biāo)準(zhǔn))... 250g
緩沖蛋白胨水(緩沖胨水增液) (BPW) 用于沙門氏、阪崎腸桿的前增培養(yǎng) 250g
緩沖蛋白胨水顆粒培養(yǎng)基 用于食品中沙門氏的前增培養(yǎng) 10袋(300mL/袋)
緩沖蛋白胨水瓶裝顆粒培養(yǎng)基(BPW) 用于食品中沙門氏的前增培養(yǎng) 250g
緩沖動(dòng)力-硝酸鹽 生化鑒定 20支/盒
緩沖動(dòng)力-硝酸鹽培養(yǎng)基 供產(chǎn)氣莢膜梭動(dòng)力和硝酸鹽還原測定用 250g
緩沖-甘油氯化鈉溶液 用于樣品的保存。(GB 4789.13-2010) 250g