咨詢電話:18117197628
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號 |
50T肉毒桿菌A/B型(CB-A/B)PCR檢測試劑盒 |
50T |
BH-P64186 |
它具有下列特點(diǎn):
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品RNA模板。
2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計,不會跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5. 本產(chǎn)品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 RT-PCR 反應(yīng)。
6. 本產(chǎn)品只能用于科研。
實(shí)驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s →58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保溫7min。
使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意:DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA,后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線(以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管,分別為 6,5,4,3,2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水(*好用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL(注:請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL,建議每次稀釋 10 倍,梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL)。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭,從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中,充分震蕩 1 分鐘,得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭,從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中,重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR(見下步),每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值,并以之為縱軸,以濃度的對數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
腦視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白抗體(逢希伯-林道氏?。┯⑽拿Q:VHLH 0.2ml
腦特異性鈉依賴無機(jī)磷轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體英文名稱:VGLUT1/BNP1 0.2ml
腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體英文名稱:VMAT2 0.2ml
腦視網(wǎng)膜血管瘤G7蛋白抗體(逢希伯-林道氏?。┯⑽拿Q:VHL 0.1ml
神經(jīng)管畸形相關(guān)蛋白VANGL2抗體英文名稱:VANGL2 0.2ml
磷酸化血管擴(kuò)張刺激磷蛋白抗體英文名稱:Phospho-VASP(Ser239) 0.1ml
磷酸化血管內(nèi)皮生長因子受體2抗體英文名稱:phospho-VEGF receptor 2 (Tyr1059) 0.1ml
01群小川型霍亂弧抗體英文名稱:V.cholera Ogawa 0.2ml
囊泡相關(guān)膜蛋白1,2,3抗體英文名稱:VAMP-1+2+3 0.1ml
神經(jīng)內(nèi)調(diào)節(jié)肽VGF抗體英文名稱:VGF/NERP2 0.1ml
重組豬細(xì)小病毒VP2蛋白抗體英文名稱:VP2 0.2ml
血管內(nèi)皮生長因子D型抗體英文名稱:VEGF-D 0.1ml
L-型電壓依賴型鈣通道α抗體英文名稱:VDCC-L alpha 0.1ml
囊泡相關(guān)膜蛋白相關(guān)蛋白A抗體英文名稱:VAPA 0.2ml
磷酸化鳥嘌呤核苷酸交換因子VAV3抗體英文名稱:phospho-VAV3(Tyr141) 0.1ml
50T肉毒桿菌A/B型(CB-A/B)PCR檢測試劑盒3%NaCl 20支
3%NaCl精氨酸雙水解酶 20支
3%NaCl鳥氨酸脫羧酶 20支
MR-VP 20支
1%NaCl甘露醇 20支
OF生化管 20支
ONPG 20支
賴氨酸脫羧酶肉湯 20支
尿素酶 20支
1%NaCl纖維二糖 20支
明膠 20支
1%NaCl阿拉伯糖 20支
精氨酸雙水解酶肉湯 20支
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。