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操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
我司主營產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè),我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時(shí),且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)博湖ELISA kit |
英文名稱 |
Mouse Aspartate Aminotransferase,AST ELISA kit |
貨號(hào) |
PM103890 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進(jìn)行30倍稀釋。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請(qǐng)不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè),且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上,使用前請(qǐng)離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請(qǐng)不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
維生素K1標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Phytonadione (Vitamin K1) 規(guī)格: 500mg 進(jìn)口、國產(chǎn)
毛果蕓香堿標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Pilocarpine 規(guī)格: 300mg 進(jìn)口、國產(chǎn)
鹽酸毛果蕓香堿標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Pilocarpine Hydrochloride 規(guī)格: 200mg 進(jìn)口、國產(chǎn)
哌咪清標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Pimozide 規(guī)格: 200mg 進(jìn)口、國產(chǎn)
心得樂標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Pindolol 規(guī)格: 200mg 進(jìn)口、國產(chǎn)
鹽酸吡格列酮標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Pioglitazone Hydrochloride 規(guī)格: 50mg 進(jìn)口、國產(chǎn)
哌西他嗪標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Piperacetazine 規(guī)格: 250mg 進(jìn)口、國產(chǎn)
哌拉西林標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Piperacillin 規(guī)格: 500mg 進(jìn)口、國產(chǎn)
標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Piperazine 規(guī)格: 200mg 進(jìn)口、國產(chǎn)
己二酸鹽標(biāo)準(zhǔn)品 英文名稱 Piperazine Adipate 規(guī)格: 200mg 進(jìn)口、國產(chǎn) 大鼠 ACTC1 基因全長ORF克隆
大鼠 ACTC1 基因全長ORF克隆
狗 IL5 基因全長ORF克隆
人 MMP-9 / CLG4B / MMP9 ELISA配對(duì)抗體
人 PTPN3 基因全長ORF克隆
小鼠 TIMD4 / TIM4 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
人 SEMA4A / Semaphorin-4A 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-CAPG / AFCP Immunomagnetic Beads IP 5 mL
小鼠 LIGHT / TNFSF14 基因全長ORF克隆
甲型流感 H1N1 (A/USSR/90/1977) 核蛋白 (Nucleoprotein / NP) 基因全長ORF克隆 (密碼子優(yōu)化)(表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
人 MRPL16 基因全長ORF克隆
人 SETD2 基因全長ORF克隆
小鼠天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)博湖ELISA kitphospho-RPS6KA1(Thr348) 磷酸化磷酸化絲氨酸/蘇氨酸激酶p90RSK蛋白抗體 0.1ml
CD40配體(CD40L)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Cluster Of Differentiation 40 Ligand (CD40L) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
PDK2 酸脫氫酶激酶亞型2抗體 0.2ml
乙酰輔酶A羧化酶α(ACACα)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Acetyl Coenzyme A Carboxylase Alpha (ACACa) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Phospho-PKC gamma (Thr514) 磷酸化蛋白激酶C亞型G抗體 0.1ml
腦鈉素(BNP)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Brain Natriuretic Peptide (BNP) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
PHD2 脯氨酸羥化酶2抗體 0.1ml
促腎上皮質(zhì)釋放(CRH)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Corticotropin Releasing Hormone (CRH) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
RET/C ret 指狀蛋白R(shí)ET抗體 0.2ml
骨成型蛋白7(BMP7)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Bone Morphogenetic Protein 7 (BMP7) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Sema7A/CD108 軸突生長因子CD108抗體 0.2ml
粘蛋白5B(MUC5B)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Mucin 5 Subtype B (MUC5B) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)