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操作流程:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
我司主營(yíng)產(chǎn)品之一,產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn),并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè),我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量,從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短,供貨及時(shí),且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。
產(chǎn)品名稱 |
小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)免費(fèi)代測(cè)ELISA Kit |
英文名稱 |
Mouse Heat Shock Protein 70,Hsp-70 ELISA Kit |
貨號(hào) |
PM103972 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板assay plate :一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard:2瓶?jī)龈善贰?br>
3、樣品稀釋液sample diluent:1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent:1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent:1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody:1×120μl/瓶1:100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin:1×120μl/瓶1:100
8、底物溶液tmb e:1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer:1×20ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution:1×10ml/瓶2n h2so4。
試劑準(zhǔn)備:
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC),試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管,每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液,如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度, 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液:用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL,進(jìn)行30倍稀釋。
樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備:
ELISA試劑盒液體樣本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
(1)血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(2)血漿:
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(3)尿液:
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
(4)細(xì)胞培養(yǎng)上清:
檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。
(5)培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
(6)組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用,請(qǐng)不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱,已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品,請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min,且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè),且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染,請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管,槍頭,封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少,在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上,使用前請(qǐng)離心處理(5-10 S 即可),使管壁上的液體集中在管底部,取用時(shí),請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外,請(qǐng)不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確,每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
芍藥苷 Paeoniflorin 23180-57-6 20mg
濱蒿內(nèi)酯 Scoparone 120-08-1 20mg
7-羥基-4-甲基香豆素 4-Methylumbelliferone 90-33-5 20mg
瑞香素 7,8-Dihydroxycoumarin 486-35-1 20mg
香豆素 Coumarin 91-64-5 20mg
芍藥內(nèi)酯苷 Albiflorin 39011-90-0 20mg
丹皮酚 Paeonol 552-41-0 20mg
二氫香豆素 Hydrocoumarin 119-84-6 20mg
東莨菪內(nèi)酯 Scopoletin 92-61-5 20mg
傘形花內(nèi)酯 7-Hydroxycoumarin 93-35-6 20mg人 XIAP / BIRC4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 XIAP / BIRC4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 CCIN 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 PLK2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 NGEF 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽
重組恒河猴 DKK-1 / Dkk1 蛋白 (256 Asn/Gln, His 標(biāo)簽)
人 LRRTM4 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 FGL2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 NMNAT2 基因全長(zhǎng)ORF克隆
人 MYC 基因全長(zhǎng)ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶Myc標(biāo)簽
人 AADAC 基因全長(zhǎng)ORF克隆
小鼠 CRP / PTX1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) (變性)
小鼠熱休克蛋白70(HSP-70)免費(fèi)代測(cè)ELISA KitPhospho-Lyn (Tyr507) 膜相關(guān)蛋白酪氨酸激酶Lyn抗體 0.1ml
嗜中性粒細(xì)胞胞漿因子2(NCF2)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Neutrophil Cytosolic Factor 2 (NCF2) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
MCP-2/CCL8 單核細(xì)胞趨化蛋白2抗體 0.2ml
蛋白二硫鍵異構(gòu)酶(PDI)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Protein Disulfide Isomerase (PDI) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
MMP-28 基質(zhì)金屬蛋白酶28抗體 0.2ml
纖維膠凝蛋白1(FCN1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Ficolin 1 (FCN1) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
CD10/MME/Neprilysin 金屬肽鏈內(nèi)切酶抗體 0.1ml
谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Glutathione S Transferase Alpha 1 (GSTa1) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
S-3/eS 合成酶-3抗體(內(nèi)皮型) 0.1ml
1,5-脫水葡萄糖醇(1,5-AG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for 1,5-Anhydroglucitol (1,5-AG) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)
Osterix 成骨相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體 0.1ml
球蛋白G(IgG)檢測(cè)試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗(yàn)法) ELISA Kit for Immuglobulin G (IgG) 規(guī)格:48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)