試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標準品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準備：
1. 使用前將所有的試劑和標本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標準品(凍干品)：每瓶標準品加入標準品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準備7個稀釋標準品的EP管，每個EP管中加入150μL的標準品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標準品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標準品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴格按照相關(guān)標準進行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴格地反復(fù)地檢測，我們以嚴謹?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實驗順利進行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實驗前準備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。
（5）培養(yǎng)細胞
檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標本
切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩吮救诨笕匀槐３?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標準品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標準品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準確，每次檢測均需做標準曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。 
（2）酶標板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
4,4-聯(lián)分子式：分子量：英文名稱：Bipiperidinyl 4,4-CAS號：78619-84-8

N-乙-N-(3-磺)芐胺英文名稱：N- ethyl -N- (3- sulfonic acid) benzyl anilineCAS號：101-11-1分子式：291分子量： C15H17NO3S

戊分子式：284.18分子量： C13H15Cl2N3英文名稱：E, eCAS號：66246-88-6

2-硝-4-乙砜氯分子式：249.67分子量： C8H8ClNO4S英文名稱：2- nitro -4- ethylCAS號：74159-80-1

1,2-二氟分子式：114.09分子量： C6H4F2英文名稱：Two - 1,2-CAS號：367-11-3

醋潑尼松龍英文名稱：Prednisolone acetateCAS號：52-21-1分子式：402.48分子量： C23H30O6

異牧荊素英文名稱：Different animal husbandryCAS號：29702-25-8分子式：432.38分子量：C21H20O10

3-溴-4-氯甲分子式：分子量：英文名稱：3- -4- chlorideCAS號：

異茴芹內(nèi)酯英文名稱：IsopimpinellinCAS號：482-27-9分子式：246.22分子量：C13H10O5

Pirimiphos-methylD6英文名稱：D6 Pirimiphos-methylCAS號：N#A700分子式：分子量：Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-LRPAP1 Immunomagnetic Beads IP    5 mL

Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-LRPAP1 Immunomagnetic Beads IP    5 mL

人 PIK3R1 基因全長ORF克隆 (表達載體), 無標簽

人 REG4 / RELP / GISP 人細胞裂解液 (陽性對照) (變性)

小鼠 RNASEL 基因全長ORF克隆

人 SUV39H1 基因全長ORF克隆

Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-CD31 / PECAM-1 Immunomagnetic Beads IP    5 mL

人 BUB3 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶Myc標簽

大鼠 IL2RG 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶FLAG標簽

人 STRN3 基因全長ORF克隆

人 EIF4EBP2 基因全長ORF克隆 (表達載體), 帶His標簽

小鼠骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA Kitphospho-GSK3 Beta (Tyr216)  磷酸化葡萄糖合成激酶3β抗體 0.1ml

基質(zhì)金屬蛋白酶7(MMP7)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Matrix Metalloproteinase 7 (MMP7)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

HHV8/ORF50  人類皰疹病毒8抗體 0.2ml

組織因子(TF)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Tissue Factor (TF)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

HPV16 E6 + HPV18 E6  人類狀瘤病毒16/18 E6抗體 0.2ml

球蛋白A(IgA)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Immuglobulin A (IgA)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

IKK beta/IKB  KB抑制蛋白激酶β抗體 0.1ml

白介素1δ(FIL1δ)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Interleukin 1 Delta (FIL1d)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

phospho-IL-7Ra(Tyr449)  磷酸化白細胞介素-7受體a抗體 0.1ml

誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(S2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Nitric Oxide Synthase 2, Inducible (S2)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)

KDM1  組蛋白賴氨酸特異性脫甲基酶1抗體 0.1ml

胰島素降解酶(IDE)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Insulin Degrading Enzyme (IDE)    規(guī)格：48T/96T 進口、國產(chǎn)