試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶凍干品。
3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實驗順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實驗前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

注意事項：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請丟棄。
3. 試劑盒使用前請在室溫恢復(fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請在試驗中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運輸過程中微量液體會沾到管壁及瓶蓋上，使用前請離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時，請用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請不要使用其他來源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設(shè)3個平行孔；設(shè)兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個空白對照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對照（N）的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標(biāo)準(zhǔn)。
4,4'-二分子式：168.28分子量： C10H20N2英文名稱：4,4'- two piperidineCAS號：15336-72-8

雙(2-甲-3-)二硫醚分子式：226.31分子量： C10H10O2S2英文名稱：Bis (2- -3-) twoCAS號：28588-75-2

1-(3-丙)咪分子式：125.17分子量： C6H11N3英文名稱：1 -（3 -丙）咪CAS號：5036-48-6

5-氟硝分子式：213.06分子量： C6F5NO2英文名稱：5- fCAS號：880-78-4

2-氯-5-甲氧并咪分子式：182.61分子量： C8H7ClN2O英文名稱：2- chloro -5- methoxy benzimidazoleCAS號：15965-54-5

3,4-二氯甲分子式：161.03分子量： C7H6Cl2英文名稱：3,4- twoCAS號：95-75-0

漢黃芩苷英文名稱：Chinese baicalinCAS號：51059-44-0分子式：460.4分子量： C22H20O11

6--2-嘧分子式：143.17分子量： C4H5N3OS英文名稱：6- amino -2-CAS號：1004-40-6

性嫩黃G英文名稱：Acid yellow GCAS號：6359-82-6分子式：380.35分子量： C16H13N4NaO4S

蕓香柚皮苷英文名稱：Yun grapefruit peel glucosideCAS號：14259-46-2分子式：580.535分子量： C27H32O14人 p38 alpha / MAPK14 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 p38 alpha / MAPK14 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 CASP14 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 無標(biāo)簽

大鼠 IL3 / interleukin 3 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

Immunoprecipitation/ IP Kit - Anti-NRAS / N-Ras Immunomagnetic Beads IP    5 mL

人 Caspase-10 轉(zhuǎn)錄變體A 基因全長ORF克隆

人 EFEMP2 基因全長ORF克隆

人 FGFR2 / CD332 (aa 400-821) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照) (變性)

人 GPC1 基因全長ORF克隆 (表達(dá)載體), 帶FLAG標(biāo)簽

食蟹猴 CSF1R 基因全長ORF克隆

人 BAMBI / NMA 基因全長ORF克隆

人 SLC2A12 基因全長ORF克隆

小鼠白三烯B4(LTB4)免費代測ELISA KitGoat Anti-rat IgG/Gold  膠體金標(biāo)記的羊抗大鼠IgG 0.5ml

親環(huán)素B(CYPB)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Cyclophilin B (CYPB)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Mouse Anti-human IgG/Alexa Fluor 555  Alexa Fluor 555標(biāo)記的小鼠抗人IgG 0.1ml

糖皮質(zhì)誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體(GITR)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Glucocorticoid Induced Tumor Necrosis Factor Receptor (GITR)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Mouse Anti-rat IgG/FITC  FITC標(biāo)記的小鼠抗大鼠IgG 0.3ml

Kruppel樣因子5(KLF5)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Kruppel Like Factor 5, Intestinal (KLF5)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-Bovine IgM/Alexa Fluor 488  Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗牛IgM 0.1ml

巨噬細(xì)胞炎性蛋白1α(MIP1α)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha (MIP1a)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-Goat IgM/Alexa Fluor 647  Alexa Fluor 647標(biāo)記的兔抗羊IgM 0.1ml

棕櫚?；さ鞍?/span>2(MPP2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Membrane Protein, Palmitoylated 2 (MPP2)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)

Rabbit Anti-human sIgA/Cy5.5  Cy5.5標(biāo)記的兔抗人分泌型IgA 0.1ml

β-1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶1(β4GALT1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)    ELISA Kit for Beta-1,4-Galactosyltransferase 1 (b4GALT1)    規(guī)格：48T/96T 進(jìn)口、國產(chǎn)