試劑配制:

1、酶聯(lián)板assay plate ：一塊96孔或者48孔。
2、標(biāo)準(zhǔn)品standard：2瓶?jī)龈善贰?br> 3、樣品稀釋液sample diluent：1×20ml/瓶。
4、生物素標(biāo)記抗體稀釋液biotin-antibody diluent：1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 hrp-avidin diluent：1×10ml/瓶。
6、生物素標(biāo)記抗體biotin-antibody：1×120μl/瓶1：100
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素hrp-avidin：1×120μl/瓶1：100
8、底物溶液tmb e：1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液wash buffer：1×20ml/瓶，使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液stop solution：1×10ml/瓶2n h2so4。

試劑準(zhǔn)備：
1. 使用前將所有的試劑和標(biāo)本緩慢均衡至室溫(18-25oC)，試劑不能直接在37oC溶解。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品)：每瓶標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液1mL，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為2000pg/mL。準(zhǔn)備7個(gè)稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的EP管，每個(gè)EP管中加入150μL的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，如圖所示依次倍比稀釋成不同的梯度， 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(0pg/mL)直接作為空白孔。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
3. 濃洗滌液：用580mL蒸餾水或去離子水將20mL濃洗滌液稀釋至600mL，進(jìn)行30倍稀釋。

我司主營(yíng)產(chǎn)品之一，產(chǎn)品皆嚴(yán)格按照相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行生產(chǎn)，并經(jīng)過了嚴(yán)格地反復(fù)地檢測(cè)，我們以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)膽B(tài)度保證產(chǎn)品的質(zhì)量，從而保證您的實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。產(chǎn)品供貨周期短，供貨及時(shí)，且我司還提供完整的售前和售后服務(wù)。本公司產(chǎn)品僅用于科研。

樣本實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
ELISA試劑盒液體樣本：包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
（1）血清
室溫血液自然凝固10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（2）血漿：
應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（3）尿液：
用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實(shí)行。
（4）細(xì)胞培養(yǎng)上清：
檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。
（5）培養(yǎng)細(xì)胞
檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
（6）組織標(biāo)本
切割標(biāo)本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

注意事項(xiàng)：

1. 試劑盒應(yīng)在有效期內(nèi)使用，請(qǐng)不要使用過期的試劑。
2. 試劑盒未使用時(shí)應(yīng)保存在 2-8℃冰箱，已復(fù)溶但未用完的標(biāo)準(zhǔn)品，請(qǐng)丟棄。
3. 試劑盒使用前請(qǐng)?jiān)谑覝鼗謴?fù) 30 min，且充分混勻試劑盒里的各種成份及制備的樣品。
4. 在試驗(yàn)中標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議作復(fù)孔檢測(cè)，且加入試劑的順序應(yīng)保持一致。
5. 為避免交叉污染，請(qǐng)?jiān)谠囼?yàn)中使用 1 次性試管，槍頭，封板膜及潔凈塑料容器。
6. 濃縮生物素化抗體和濃縮酶結(jié)合物的體積較少，在運(yùn)輸過程中微量液體會(huì)沾到管壁及瓶蓋上，使用前請(qǐng)離心處理（5-10 S 即可），使管壁上的液體集中在管底部，取用時(shí)，請(qǐng)用移液器小心吹打幾次。
7. 除了試劑盒中的濃縮洗滌液和終止液可以通用外，請(qǐng)不要使用其他來(lái)源試劑盒內(nèi)含的試劑代替本試劑盒中的某單個(gè)組分。
8. 為保證結(jié)果準(zhǔn)確，每次檢測(cè)均需做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

操作流程：
（1）待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl，每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔；設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔，每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl；另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔，加入純細(xì)胞裂解液100μl。 
（2）酶標(biāo)板置4℃，包被過夜。
（3）洗板：吸干孔內(nèi)反應(yīng)液，用洗滌液過洗一遍（將洗滌液注滿板孔后，即甩去），之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
（4）陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。 
（5）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。 
（8）酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應(yīng)15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。 
（12）分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測(cè)得的OD值為兩者之差（W1-W2），以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
（13）數(shù)據(jù)處理：在得出標(biāo)本（S）和陰性對(duì)照（N）的 OD值后，計(jì)算S/N值。S/N≥2.1為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
豆粉瓊脂/血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基/血液瓊脂基礎(chǔ)/Blood Agar Base供分離營(yíng)養(yǎng)要求較高的致病用250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口

BGC823(胃細(xì)胞)殺結(jié)核鏈霉 Streptomyces tubercidicus

血管**素4(ANGPT4)重組蛋白英文名稱：Recombinant Angiopoietin 4 (ANGPT4)

MFC(小鼠胃細(xì)胞)溝腸桿 Enterobacter cloacae

KP-N-NS(腎上腺神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(腦轉(zhuǎn)移))5×106cells/瓶×2

前列腺成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基Caki-1(腎透細(xì)胞細(xì)胞)

大鼠晶狀體上細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1(TGFβ1)重組蛋白英文名稱：Recombinant Transforming Growth Factor Beta 1 (TGFb1)

雅致放射毛霉 Actinomucor elegans青霉 Penicillium sp.

大鼠氣管和支氣管上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL

蛹蟲草 Cordyceps millitaris黑化大家鼠肺成纖維樣細(xì)胞（3-chlorophenyl）-3-（5-（2-（thieno[3，2-d]pyrimidin-4-ylamino）ethyl）thiazol-2-yl）urea mesyalteSNS-314

（2E）-3-（3，4-dihydroxyphenyl）prop-2-enoic acid； 3，4-dihydroxy-cinnamic acidCaffeic acid

NBQX （sodium salt） （50 mg）1，2，3，4-tetrahydro-6-nitro-2，3-dioxo-benzo[f]quinoxaline-7-sulfonamide， disodium salt； NBQX （sodium salt）

杜氏磷緩沖液（10LT）Dulbecco’s PBS， Without calcium and magnesium.

9（R）-HODE （250 ug）9R-hydroxy-10E，12Z-octadecadienoic acid； 9（R）-HODE

SDB-005 （10 mg）naphthalen-1-yl 1-pentyl-1H-indazole-3-carboxylate

SQ 29，548 （100 mg）[1S-[1。alpha。，2。alpha。（Z），3。alpha。，4。alpha。]]-7-[3-[[2-[（phenylamino）carbonyl]hydrazino]methyl]-7-oxabicyclo[2。2。1]hept-2-yl]-5-heptenoic acid； SQ 29，548

CAY10686 （10 mg）N-

N-Benzyl-3，5-dicarbethoxy-4-phenyl-1，4-dihydropyridineBML-278

17-phenyl trinor Prostaglandin F2α cyclohexyl amide （10 mg）N-cyclohexyl-9α，11α，15S-trihydroxy-17-phenyl-18，19，20-trinor-prosta-5Z，13E-dien-1-amide； Bimatoprost cyclohexyl amide； 17-phenyl trinor Prostaglandin F2α cyclohexyl amide

3-bromo-7-Nitroindazole （100 mg）3-bromo-7-nitro-1H-indazole； 3-bromo-7-Nitroindazole

細(xì)胞膜熒光探針DiO，高氯鹽DiO pechlorate [3，3-Dioctadecyloxacarbocyanine pechlorate]

小鼠骨形成蛋白8B(BMP8B)免費(fèi)代測(cè)ELISA Kit小鼠白血病細(xì)胞G-CSF依賴性巨大芽胞桿 Bacillus megaterium

兔腎素(Renin)ELISA試劑盒英文名稱：Rabbit Renin ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T膠原凝集素(Collectin)ELISA Kit，48T/96T

內(nèi)皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基小鼠牙細(xì)胞完全培養(yǎng)基

兔子腸脂肪酸結(jié)合蛋白(iFABP)ELISA試劑盒英文名稱：rabbit intestinal fatty acid binding protein,iFABP ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T胸腺白血病抗原(TLa)ELISA Kit，48T/96T

釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae唾液桿水楊素亞種 Lactobacillus salivarius subsp. salicinius

α-銀環(huán)蛇(α-BGT)ELISA試劑盒 英文名稱：α-bungarotoxin,α-BGT ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠抗雙鏈DNA抗體/天然DNA抗體(dsDNA)ELISA Kit，48T/96T  

豇豆慢生根瘤 Bradyrhizobium vigna大麗輪枝 Verticillium dahliea

鹿血清淀粉樣蛋白A(SAA)ELISA試劑盒英文名稱：Deer Serum amyloid A,SAA ELISA Kit規(guī)格:96T/48T大鼠乙酰膽堿酯酶(AChE)ELISA Kit，48T/96T  

ZR-75-1(腺細(xì)胞)BRL 3A, 大鼠肝正常細(xì)胞

可溶性CD40配體(sCD40L)ELISA試劑盒 英文名稱：Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand，sCD40L ELISA Kit 規(guī)格:96T/48T骨成型蛋白4(BMP-4)ELISA Kit，48T/96T 進(jìn)口/國(guó)產(chǎn)

炭黑曲霉 Aspergillus carbonarius地衣芽孢桿 Bacillus licheniformis

N端前腦鈉素(NT-proBNP)ELISA試劑盒英文名稱：Human N-terminal pro-brain natriuretic peptide，NT-proBNP ELISA Kit規(guī)格:96T/48T小鼠凋亡相關(guān)因子配體(FASL)ELISA Kit，48T/96T 進(jìn)口/分裝