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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞;MKN-28-luc-EGFP
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
MKN-28-LUC-EGFP
1×106
P-X11323
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；MKN-28-LUC-EGFP；人胃癌細(xì)胞-熒光素酶標(biāo)記-綠色熒光蛋白；人胃癌細(xì)胞-LUC-EGFP
種屬來(lái)源；人
年齡性別；37歲
組織來(lái)源；胃
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣
背景簡(jiǎn)介；MKN-28-LUC細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc和EGFP基因
細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)
細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測(cè)；無(wú)
培養(yǎng)基；RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S+1. 0ug/ml puro
培養(yǎng)條件；氣相：100%空氣；溫度：37℃
凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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倉(cāng)鼠心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
果糖-1,6-二磷酸酶(FBP)/果糖-1,6-二磷酸酯酶測(cè)試盒 |
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TNNI3 ELISA kit |
純化線粒體蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法測(cè)定試劑盒 |
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人端粒重復(fù)序列結(jié)合因子1(TERF1)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
大鼠雙氫睪酮（DHT）elisa檢測(cè)試劑盒 |
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HumanTERF1ELISAkit |
總膽固醇TCH酶法測(cè)試盒液體 100ml 手工/半自動(dòng) |
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組織MAPKAP KINASE3激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） |
藍(lán)藻果聚糖化學(xué)法比色法定量檢測(cè)試劑盒 |
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人半乳糖(Galactose)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
四分子交聯(lián)體4/四旋蛋白4/四次跨膜蛋白4抗體 TSPAN4 |
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大鼠成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子10(FGF10)elisa檢測(cè)試劑盒 |
糖蛋白VI/六糖蛋白抗體 Glycoprotein VI |
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小鼠胰島素受體底物2(IRS2)elisa檢測(cè)試劑盒 |
PRAM1蛋白抗體 PRAM1 |
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畸胎瘤衍化生長(zhǎng)因子抗體(N端) CRIPTO |
RASL10B蛋白抗體 RASL10B |
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血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1重組兔單克隆抗體 VEGFR1 |
2’,3’-環(huán)腺苷酸-3’-磷酸二酯酶重組鼠單克隆抗體 CNPase |
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巖藻糖轉(zhuǎn)移酶2抗體 FUT2 |
3號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框37抗體 C3orf37 |
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蛋白酶體激活因子PA28γ抗體 PSME3 |
肌球蛋白1F抗體 MYO1F |
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凋亡相關(guān)蛋白2抗體 PDCD2 |
FITC標(biāo)記小鼠CD49d單克隆抗體 mouse CD49d/FITC |
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FC段IgE受體α多肽/Fc ε RIα抗體 Fc ε RIα/Fc epsilon RI |
人胃癌高轉(zhuǎn)移細(xì)胞;MKN-28-luc-EGFP磷脂酰肌醇激酶（PI3Kβ）重組兔單克隆抗體 PI3-kinase p110 subunit beta |
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膜相關(guān)磷脂轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體 NIR1 |
大鼠肌紅蛋白(MYO/MB)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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魚(yú)溶菌酶(腎淀粉樣變)(LZM)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
組織RSK1激酶活性定量檢測(cè)試劑盒（A/B/C） |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開(kāi)始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。