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細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
人胃癌細(xì)胞+luc;NCI-N87-LUC-EGFP-PURO
英文簡(jiǎn)稱
規(guī)格
貨號(hào)
NCI-N87-EGFP-LUC
1×106
P-X11312
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞別稱；NCI-N87-EGFP-LUC；人胃癌細(xì)胞-綠色熒光蛋白-熒光素酶標(biāo)記；NCI-N87-綠色熒光蛋白-熒光素酶標(biāo)記
種屬來源；人
組織來源；胃
生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)
形態(tài)特征；上皮細(xì)胞樣
特別注意；NCI-N87-LUC-EGFP細(xì)胞培養(yǎng)過程中會(huì)長(zhǎng)空泡，屬于正?，F(xiàn)象
puro藥篩濃度；NCI-N87細(xì)胞puro藥篩濃度為0.5ug/ml，培養(yǎng)過程中建議使用0.2ug/ml濃度puro維持
背景簡(jiǎn)介；NCI-N87細(xì)胞表達(dá)表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72, 并且沒有多巴胺脫羧酶(DDC)活性。它們的血管活性的腸肽(VIP)受體活性極低并缺乏胃泌受體。 它們表達(dá)蕈毒堿膽堿受體。沒有證據(jù)表明存在N-myc, L-myc, myb和EGF受體基因的重組。這個(gè)細(xì)胞株表達(dá)的c-myc和c-erb-B 2 RNA水平與其它細(xì)胞株相當(dāng)。以下基因不表達(dá): N-myc, L-myc, c-cis, IGF-2, 或胃泌釋放肽。據(jù)報(bào)道NCI-N87 細(xì)胞的植板率為4.3%。Luciferase NCI-N87細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)螢火蟲熒光素酶和綠色熒光蛋白。該細(xì)胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時(shí)不需要添加維持?？捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測(cè)中的陽(yáng)性對(duì)照，也可用于活體動(dòng)物成像實(shí)驗(yàn)。NCI-N87細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶Luc基因。
STR位點(diǎn)；Amelogenin：X，Y；CSF1PO：8,12；D13S317：8,11；D16S539：9，13；D18S51：17；D19S433：14,14.2；D21S11：30；D2S1338：23，24；D3S1358：14；D5S818：12,13；D7S820：10,11；D8S1179：14；FGA：20,21；TH01：9；TPOX：9,11；vWA：15，16；
保藏機(jī)構(gòu)；ATCC; CRL-5822；中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞資源中心
產(chǎn)品規(guī)格；1x106cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)基；90%RPMI-1640+10%FBS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實(shí)驗(yàn)原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β2(TGFβ2)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
CTGF檢測(cè)試劑盒 |
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TGFβ2 ELISA Kit |
HumanCalprotectin檢測(cè)試劑盒 |
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人抵抗素(Resistin)elisa生化檢測(cè)試劑盒 |
人鈣衛(wèi)蛋白elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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humanResistinELISAKIT |
PⅢCP ELISA Kit |
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小鼠抗環(huán)胍氨酸肽抗體(Anti-CCP-antibody)elisa檢測(cè)試劑盒 |
大鼠Ⅲ型前膠原C端肽(PⅢCP)elisa分析檢測(cè)試劑盒 |
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大鼠α葡萄糖苷酶(a-Glu)elisa檢測(cè)試劑盒 |
TBC結(jié)構(gòu)域的蛋白激酶樣蛋白抗體 |
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總膽汁酸（TBA）定量檢測(cè)試劑盒 |
HSPC302/TBCK |
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人P16elisa檢測(cè)試劑盒 |
2-氨基乙硫醇雙加氧酶抗體 |
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大鼠脂多糖（LPS）elisa檢測(cè)試劑盒 |
ADO |
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PELO蛋白抗體 |
山羊甲狀腺素(T4)elisa檢測(cè)試劑盒免費(fèi)代測(cè) |
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PELO |
乳品三聚氰胺快速顯色定性檢測(cè)試劑盒（家用型/工業(yè)型） |
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FLJ36492蛋白抗體 |
活體細(xì)胞線粒體膜通道孔（MPTP）紅色熒光（TMRM）檢測(cè)試劑盒 |
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CCDC144B |
凋亡相關(guān)蛋白6抗體 Anti-PDCD6/ALG2 |
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轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1γ抗體 Anti-TIF1 gamma/Trim33 |
人胃癌細(xì)胞+luc;NCI-N87-LUC-EGFP-PURO磷酸化蛋白酪氨酸激酶9抗體 Anti-phospho-PTK9/TWF1(Tyr321) |
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絲氨酸蛋白酶抑制劑B10抗體 Anti-SERPINB10 |
Donkey Anti-Human IgG H&L / RBITC |
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羅丹明標(biāo)記的驢抗人IgG H&L |
突觸融合蛋白結(jié)合蛋白5抗體 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。