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細胞接收后的處理:
1)收到細胞后,75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。
2)請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài),同時給剛收到的細胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3)貼壁細胞:細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上,可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中,若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1:2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
A498-LUC-PURO
1×106
P-X11296
產(chǎn)品詳情:
細胞別稱;A498-LUC-PURO;人腎透明細胞癌-株熒光素酶標記;人腎透明細胞癌-LUC-PURO
種屬來源;人
組織來源;腎
生長特性;貼壁生長
細胞形態(tài);上皮細胞樣
背景簡介;Luciferase A498細胞穩(wěn)定表達螢火蟲熒光素酶。該細胞株性狀穩(wěn)定,培養(yǎng)時不需要添加維持??捎米魑灮鹣x熒光素酶活性檢測中的陽性對照,也可用于活體動物成像實驗。該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶Luc基因。A-498細胞是由Aaronson·S建立,源自一位52歲患有腎癌的女性病人。
生物等級;1
細胞規(guī)格;1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測;無
保藏機構;ATCC; CRL-7908 ATCC; HTB-44 DSMZ; ACC-55
培養(yǎng)基;MEM+10% FBS+PS+1. 0ug/ml puro
培養(yǎng)條件;氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃
凍存條件;無血清凍存液,液氮儲存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
(1)1mL凍存管包裝干冰運輸,收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。(2)T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨,收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備DMEM培養(yǎng)基;胎牛血清,10%;雙抗,1%。
2)培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。
二.細胞處理:
1)凍存細胞的復蘇::將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:1、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3)細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例:
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理:
公司正在出售的產(chǎn)品:
γ干擾素(IFNG)elisa生化檢測試劑盒 |
血糖含量測試盒 |
IFNG ELISA kit |
人chemerin elisa檢測試劑盒免費代測 |
人蛋白酪氨酸磷酸酶自身抗體elisa生化檢測試劑盒 |
全組織組織化學AP酶聯(lián)NBT/BCIP完全間接檢測試劑盒(含一抗和AP二抗) |
HumanTyrosinePhosphataseAutoantibodiesELISAKit |
大鼠Ki-67蛋白(Ki67P)elisa檢測試劑盒 |
二氫黃酮醇還原酶(DFR)測試盒 |
小鼠高遷移率族蛋白1(HMGB1)elisa檢測試劑盒 |
細胞CASPASE-1蛋白表達熒光定量檢測試劑盒 |
絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶LMTK3抗體 LMTK3 |
小鼠FAM172A蛋白(FAM172A)elisa檢測試劑盒 |
絲裂原誘導蛋白2抗體 Kindlin 2 |
果糖-1,6-二磷酸醛縮酶(FDA)測試盒 |
PE標記人/小鼠CD11b單克隆抗體 human/mouse CD11b/PE |
肌鈣蛋白C2抗體 TNNC2 |
PE標記小鼠H-2Dk單克隆抗體 mouse H-2Dk/PE |
信號轉導銜接蛋白1抗體 STAM |
14-3-3E蛋白重組兔單克隆抗體 14-3-3 epsilon |
血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體 Von Willebrand Factor |
1號染色體開放閱讀框43抗體 C1orf43 |
膽固醇酯轉移蛋白抗體 CETP |
環(huán)指蛋白211抗體 RNF211 |
蛋白磷酸酶PPP1R11抗體 PPP1R11 |
FBXL8蛋白抗體 FBXL8 |
FAM155A蛋白抗體 FAM155A |
人腎癌細胞+luc;A498-LUC-PURO磷酸化異染色質(zhì)蛋白1抗體 phospho-HP1 alpha (Ser92) |
貓眼綜合征染色體候選基因2抗體 CECR2 |
細胞AKT蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒 |
鮭魚elisa分析檢測試劑盒 |
小鼠CD45分子(CD45)elisa分析檢測試劑盒 |
實驗步驟:
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上,利用293T細胞進行慢病毒包裝,獲得含目的基因的慢病毒;
2 轉染前24 h進行細胞鋪板,轉染時細胞密度控制在80%左右;
3 天加入適量病毒懸液感染細胞,并置于37 ℃,5% CO2培養(yǎng)箱中孵育;
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基,并繼續(xù)培養(yǎng);
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng),直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%,獲得穩(wěn)轉細胞系。