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細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
HEK293-EGFP-PURO
1×106
P-X11287
產(chǎn)品詳情：
細胞別稱；HEK293-EGFP-PURO；人腎上皮細胞系-EGFP；人胚腎細胞株-綠色熒光蛋白標記
種屬來源；人
組織來源；胚胎腎
生長特性；貼壁生長
細胞代數(shù)；p3-p8
特別注意；該細胞貼壁不牢，運輸過程中細胞會有脫落，如細胞脫落，請離心收集，消化后重新鋪瓶
背景簡介；Luciferase HEK-293細胞穩(wěn)定表達螢光蛋白。該細胞株性狀穩(wěn)定，培養(yǎng)時不需要添加維持?？捎米魑灩獾鞍谆钚詸z測中的陽性對照，也可用于活體動物成像實驗。該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。 HEK-293細胞是剪切過的人腺病毒5(Ad5)轉(zhuǎn)染的人胚腎細胞形成的永生化細胞，HEK-293細胞包含并表達轉(zhuǎn)染的Ad5基因。早期報道中指出，293 HEK-293細胞基因組中含有腺病毒5(Ad5)基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對Ad5的插入點的克隆測序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1-4344位線性核苷酸整合入293 [HEK-293]細胞19號染色體(19q13.2)。293 [HEK-293]細胞為人類腺病毒載體擴的宿主，可表達異常的玻連蛋白的細胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。
生物等級；2
細胞規(guī)格；1x106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測；無
保藏機構(gòu)；ATCC; CRL-1573 ATCC： PTA-4488 DSMZ： ACC-305 ECACC： 85120602
培養(yǎng)基；90% DMEM+10% FBS+PS+1. 0ug/ml puro
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
干冰運輸及復(fù)蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產(chǎn)品：
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骨鈣素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)elisa生化檢測試劑盒 |
DNA Ladder 5000 60T |
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OT/BGP ELISA Kit |
大量全血基因組DNA純化試劑盒（20毫升全血） |
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人蛋白激酶C beta II(PKC-bII)elisa生化檢測試劑盒 |
大鼠內(nèi)脂素(visfatin)elisa檢測試劑盒 |
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PKC-bIIELISAKit |
土壤幾丁質(zhì)酶測試盒 |
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大鼠β位淀粉樣前體蛋白裂解酶2(BACE2)elisa檢測試劑盒 |
LAMBDA噬菌體DNA氯化銫純化試劑盒 |
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小鼠抗心肌抗體(AMA)elisa分析檢測試劑盒 |
水通道蛋白-2抗體 AQP2 |
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乳酸脫氫酶工酶LDH-1測試盒 R1：40ml×1 抑制法 |
絲氨酸水解酶樣蛋白2抗體 SERHL |
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植物胱硫醚-β-合成酶（Cystathionine-β-synthase；CBS）活性比色法定量檢測試劑盒 |
PELI3蛋白抗體 PELI3 |
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活化轉(zhuǎn)錄因子6β抗體 ATF6 beta |
PE標記人FOXP3單克隆抗體 human FOXP3/PE |
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新的飽食分子蛋白抗體 Nucleobindin 2 |
組織相容性抗原DQA1重組兔單克隆抗體 HLA-DQA1 |
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嗅覺受體5H2抗體 OR5H2 |
1號染色體開放閱讀框113抗體 C1orf113 |
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大腦邊緣系統(tǒng)相關(guān)膜蛋白抗體 LSAMP |
環(huán)腺苷酸應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體 CRTC1 |
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蛋白激酶錨定蛋白樣蛋白2抗體 NBEAL2 |
FAM96B蛋白抗體 FAM96B |
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EXOSC8蛋白抗體 EXOSC8 |
人胚腎細胞+Egfp;HEK293-eGFP-puro磷酸化細胞周期檢測點激酶1抗體 phospho-CHEK1 (Ser286) |
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磷脂轉(zhuǎn)移蛋白抗體 PLTP |
大鼠干擾素誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)elisa檢測試劑盒 |
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小鼠腫瘤壞死因子受體超家族成員11A(TNFRSF11A/RANK)elisa檢測試劑盒 |
組織樣品組織G（CATHEPSIN G）活性比色法定量檢測試劑盒 |
實驗步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進行細胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞系。