干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞;HRCEC

英文名稱	HRCEC	產(chǎn)品形態(tài)	上皮細(xì)胞樣 貼壁生長(zhǎng)
貨號(hào)	P-X11248	產(chǎn)品分類	人
規(guī)格	1×106	包裝	株
來(lái)源	眼	用途	僅供科研研究使用

細(xì)胞特性：

細(xì)胞別稱；HRCEC；人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞

種屬來(lái)源；人

組織來(lái)源；眼

生長(zhǎng)特性；貼壁生長(zhǎng)

細(xì)胞形態(tài)；上皮細(xì)胞樣

細(xì)胞代數(shù)；10代以內(nèi)

細(xì)胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝

支原體檢測(cè)；無(wú)

培養(yǎng)基；ECM完全培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

凍存條件；無(wú)血清凍存液，液氮儲(chǔ)存

細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1 mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤(rùn)洗細(xì)胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤(rùn)所有細(xì)胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細(xì)胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞，裝入無(wú)菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無(wú)血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

狗15 - 酮基-13,14-二氫前列腺素F2α(15-keto-13,14-dihydro-PGF2α)elisa生化檢測(cè)試劑盒	溶菌酶LZM測(cè)試盒帶標(biāo)準(zhǔn) 30管/28樣 比濁法
14-dihydro-PGF2α ELISA kit	體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶4F3B（LEUKOTRINE B4）
人單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)elisa生化檢測(cè)試劑盒	人核心結(jié)合因子α1,CBFA1/RUNX2 elisa分析檢測(cè)試劑盒
HumanMCP-3ELISAkit	蔗糖磷酸化酶測(cè)試盒
體液L－乳酸比色法定量檢測(cè)試劑盒	大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6(bFGF-6)elisa檢測(cè)試劑盒
犬β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa檢測(cè)試劑盒	衰變加速因子CD55抗體 CD55
大鼠2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)elisa分析檢測(cè)試劑盒	絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶SIK3抗體 SIK3
小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基(sRANKL)elisa檢測(cè)試劑盒	PE-Cy5標(biāo)記小鼠CD38單克隆抗體 mouse CD38/PE-Cy5
環(huán)指蛋白62抗體 RNF62/MKRN2	PE標(biāo)記人CD23單克隆抗體 human CD23/PE
鋅指蛋白924抗體 ZBTB41	組蛋白去乙酰化酶4重組兔單克隆抗體 HDAC4
胸腺五肽抗體 TP-5/Thymopentin	17β羥基類固醇脫氫酶12/17β-HSD12抗體 HSD17B12
促黃體素β亞單位重組兔單克隆抗體 LHB	紅色熒光蛋白單克隆抗體 RFP
蛋氨酸亞砜還原酶B2抗體 MSRB2	FAM198B蛋白抗體 FAM198B
Endokinin-C抗體 Endokinin-C	人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞;HRCEC磷酸化糖原合酶激酶3α抗體 Phospho-GSK3A (Ser21)
卵黃狀黃斑病蛋白4抗體 Bestrophin 4	人γ干擾素受體(IFN-γR)elisa分析檢測(cè)試劑盒
組織SPHK激酶總活性比色法定量檢測(cè)試劑盒（510）	大鼠白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)elisa檢測(cè)試劑盒

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng):

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。 
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。 
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。 
5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。 
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。 
8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。