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細胞接收后的處理：
1）收到細胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認細胞狀態(tài)，同時給剛收到的細胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細胞狀態(tài)的依據。
3）貼壁細胞：細胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團的情況。若鏡下觀察細胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細胞生長密度達70%-80%以上，可以對細胞進行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。收到細胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
英文簡稱
規(guī)格
貨號
bEnd.3 BEND
1×106
P-X10423
產品詳情：
細胞別稱；bEND.3; b.End3; Bend.3; bEnd3; brain-derived Endothelial cells.3；小鼠微血管內皮細胞
種屬來源；小鼠
年齡性別；6周齡
組織來源；腦微血管
生長特性；貼壁生長
細胞形態(tài)；上皮細胞樣
背景簡介；細胞用表達多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉錄病毒轉染進行轉化。觀察到血管性血友病因子的表達及對熒光標記的低密度脂蛋白（LDL）的攝入確認其內皮細胞特性。bEnd.3 cells細胞可用細胞因子和脂多糖(LPS)誘導細胞的Peyer＇s結高內皮細胞受體，粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及內皮細胞選擇素的表達。腫瘤壞死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的誘導作用是濃度及時間依賴的。
細胞代數；10代以內
背景介紹；Bend.3細胞轉染了表達多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆轉錄病毒載體。
生物等級；1
細胞規(guī)格；1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝
支原體檢測；無
保藏機構；ATCC; CRL-2299 BCRC; 60515 ECACC; 96091929
培養(yǎng)基；90%DMEM+10%FBS+PS
培養(yǎng)條件；氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
凍存條件；無血清凍存液，液氮儲存
干冰運輸及復蘇好存活細胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。
1）準備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細胞處理：
1）凍存細胞的復蘇：：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。
3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數板計數，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標注好名稱、代數、日期等信息。
3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
公司正在出售的產品：
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KLK8ELISAKit |
跨膜蛋白SEMA5B抗體 Anti-SEMA5B/Semaphorin 5B |
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核糖體蛋白S6修飾樣蛋白A抗體 Anti-RIMKLA/FAM80A |
多腺苷二磷酸多聚酶PARP10抗體 |
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神經組織特異性F肌動蛋白結合蛋白抗體 Anti-Neurabin 1/PPP1R9A |
甲狀旁腺抗體 |
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黃嘌呤氧化酶抗體 Anti-XDH/Xanthine Oxidase |
Rabbit Anti-Chicken IgY / HRP |
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PARP10 |
辣根過氧化物酶標記兔抗雞IgY抗體 |
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HHIP樣蛋白1抗體 |
核苷酸內焦磷酸酶/磷酸二酯酶1抗體 Anti-ENPP1/PC1/3 |
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HHIPL1 |
脂滴包被蛋白Perilipin-A抗體 Anti-Perilipin A |
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腫瘤壞死因子配體超家族成員4抗體 Anti-TNFSF4/CD252 |
parathyroid hormone |
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大鼠CXC趨化因子受體5(CXCR5)elisa生化檢測試劑盒 |
鋅指蛋白568抗體 Anti-ZNF568 |
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CXCR5 ELISA Kit |
利鈉肽受體A抗體 Anti-Natriuretic Peptide Receptor A |
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人睪酮(T)elisa生化檢測試劑盒 |
抵抗素樣分子α抗體 Anti-RELMa/RELM alpha |
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TELISAKit |
彈性蛋白酶抑制劑抗體 Anti-SKALP/Elafin |
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CCK-8細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒3000T |
革蘭氏陰性菌蛋白提取試劑盒50T |
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小鼠成神經細胞瘤RAS 病毒(v-ras)癌基因同源物elisa生化檢測試劑盒 |
bEnd.3 [BEND3]（小鼠腦微血管內皮細胞株）石蠟切片組蛋白H3-K9甲基化組化定量檢測試劑盒 |
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黑色素瘤相關抗原6抗體 |
無精癥缺失相關蛋白2抗體 |
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MAGEA6 |
DAZAP2 |
實驗步驟：
1 將目的基因構建到合適的慢病毒載體上，利用293T細胞進行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉染前24 h進行細胞鋪板，轉染時細胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉細胞系。