咨詢電話：18117197628
HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP
英文簡稱
規(guī)格
貨號
HUVEC+GFP:HUVECGFP
1×106
P-X789
產(chǎn)品詳情：
細(xì)胞介紹
該細(xì)胞來源于人靜脈內(nèi)皮，可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆，在抑制小鼠中不能形成腫瘤。
該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。
細(xì)胞特性
1） 來源：人臍帶組織
2） 形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣 貼壁生長
3） 含量：>1×10? 細(xì)胞數(shù)
4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝
5) 用途：僅供科研使用。
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代。
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備DMEM培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2）培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜
。天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：1、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。
3、輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：
1、細(xì)胞凍存時按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml.
2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細(xì)胞/ml分配到一個凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。
3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
實驗原理：
實驗步驟：
1 將目的基因構(gòu)建到合適的慢病毒載體上，利用293T細(xì)胞進(jìn)行慢病毒包裝，獲得含目的基因的慢病毒；
2 轉(zhuǎn)染前24 h進(jìn)行細(xì)胞鋪板，轉(zhuǎn)染時細(xì)胞密度控制在80%左右；
3 天加入適量病毒懸液感染細(xì)胞，并置于37 ℃，5% CO2培養(yǎng)箱中孵育；
4 24 h后用新鮮培養(yǎng)基替換含有病毒的培養(yǎng)基，并繼續(xù)培養(yǎng)；
5 在轉(zhuǎn)染3-4天后開始加藥篩選培養(yǎng)，直至顯微鏡下觀察熒光細(xì)胞比例為100%，獲得穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
公司正在出售的產(chǎn)品：
|
核因子1C型抗體 |
鋅指蛋白537抗體 ZNF537 |
|
NFIC |
DPM1蛋白抗體 DPM1 |
|
7號染色體開放閱讀框42抗體 |
次黃嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶1單克隆抗體 HPRT1 |
|
C7orf42 |
層粘連蛋白B2γ1抗體 Laminin B2 gamma 1 |
|
ELAVL1抗體 ELAVL1 |
鋅指蛋白835抗體 ZNF835 |
|
磷酸化酪氨酸激酶C-SRC抗體 phospho-CSK (Ser364) |
12號染色體開放閱讀框24抗體 C12ORF24 |
|
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶激酶1/2重組兔單克隆抗體 Phospho-MEK1/2 (Ser218 + Ser222) |
黑色素瘤硫酸軟骨素蛋白多糖4抗體 NG2 |
|
組蛋白H3K9甲基轉(zhuǎn)移酶4抗體 SETDB1/KMT1E |
環(huán)指蛋白156抗體 RNF156 |
|
冰凍切片制片預(yù)處理脫水液 |
PDLIM2蛋白抗體 PDLIM2 |
|
堿性木聚糖酶測定試劑盒 |
PerCP-Cy5.5標(biāo)記人HLA-DR單克隆抗體 human HLA-DR/PerCP-Cy5.5 |
|
動物牙齒DNA萃取試劑盒 |
神經(jīng)細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子LDB1抗體 LDB1 |
|
小鼠谷氨酸脫羧酶自身抗體IgG(GAD-Ab-IgG)elisa分析檢測試劑盒 |
雙甲基精氨酸水解酶2抗體 DDAH2 |
|
人催乳素抑制(PIH)elisa檢測試劑盒 |
小鼠組蛋白H3(H3)elisa檢測試劑盒 |
|
雙歧桿菌（Bifidobacterium）鑒定 |
HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP大鼠葡萄糖激酶(GK)elisa檢測試劑盒 |
|
大鼠白介素5（IL－5）elisa檢測試劑盒 |
人CD19分子(CD19)elisa分析檢測試劑盒 |
|
小鼠凝血因子Ⅷ(F8)elisa檢測試劑盒 |
細(xì)胞基質(zhì)金屬（MMP-2）琥珀酰明膠法比色定量檢測試劑盒 |