干冰運輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

HGC-27+YFP人胃癌細(xì)胞黃色熒光標(biāo)記

英文名稱	HGC-27+YFP:HGC27YFP	產(chǎn)品形態(tài)	上皮細(xì)胞樣 貼壁生長
貨號	P-X759	產(chǎn)品分類	人細(xì)胞系
規(guī)格	1×106	包裝	株
來源	人胃癌	用途	僅供科研研究使用

細(xì)胞特性：

細(xì)胞介紹：

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶 YFP 基因。

細(xì)胞特性

1） 來源：人胃癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長

3） 含量：>1x10^6 細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25 瓶或者 1mL 凍存管包裝

5) 用途：僅供科研使用。

細(xì)胞篩選：

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染 YFP 的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其 YFP 熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。 建議收到細(xì)胞后至少傳 3 代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時，建議加入終濃度為 1ug/ml 嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含 2ug/ml 嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至高濃度為 5ug/ml。

若篩選過程中，漂浮細(xì)胞大于 60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約 80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入 5ug/ml嘌呤霉素時細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

細(xì)胞接收后的處理：
1）收到細(xì)胞后，75%酒精瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請拍照后及時聯(lián)系我們。
2）請在4或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時收到時細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運送過程中會因振動脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運輸振動脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                      
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1） 準(zhǔn)備MEM（推薦iCell-0012）培養(yǎng)基；胎牛血清，10%；雙抗，1%。
2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作:

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1 mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 4 mL 培養(yǎng)基混 合均勻。在 1000 rpm 條件下離心 3 min，棄去上清液，加 1-2 mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有 細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜 (或?qū)⒓?xì)胞懸液加入 6 cm 皿中，加入約 4 mL 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜) 。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。 a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。
b、加 1 mL 消化液 (0.25%Trypsin-0.53mM EDTA) 于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，棄去 消化液，將培養(yǎng)瓶置于 37℃培養(yǎng)箱中消化 1 -3min (視細(xì)胞消化情況而定) ，然后在顯微鏡下 觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        。
c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；
a、收集細(xì)胞，裝入無菌離心管中，1000 rpm 條件下離心 4 min，棄去上清液， 用 PBS 清洗一遍，棄盡 PBS，進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)。
b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度 5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍 存管凍存 1mL 細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。
c、將凍存管放入-80℃冰箱，24 h 后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產(chǎn)品：

木瓜酶抗體	鋅指蛋白350/乳腺癌易感基因1結(jié)合蛋白抗體 ZNF350
Papain	DNA聚合酶δ催化亞單位/DNA pol δ cat抗體 DNA Polymerase delta, catalytic subunit
鈣營養(yǎng)蛋白1/鈣結(jié)合蛋白8抗體	成纖維細(xì)胞激活蛋白α重組兔單克隆抗體 FAP
Calneuron 1	補體C1q和腫瘤壞死因子相關(guān)蛋白5抗體 CTRP5
EDEM3蛋白抗體 EDEM3	鋅指蛋白737抗體 ZNF737
磷酸化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3抗體 phospho-CDC27 (Thr244)	組織蛋白酶H輕連抗體 Cathepsin H light chain
磷酸化上皮鈉通道β2抗體 phospho-SCNN1B (Thr615)	核纖層蛋白B重組兔單克隆抗體 Lamin B1
自噬相關(guān)蛋白4C抗體 ATG4C	互養(yǎng)蛋白3抗體 SNTB2/Syntrophin-3
冰凍切片組織K（CATHEPSIN K）活性原位熒光染色檢測試劑盒	P5C還原酶1抗體 PYCR1
雞補體3裂解產(chǎn)物(C3SP)elisa分析檢測試劑盒	PE-Cy7標(biāo)記人CD2單克隆抗體 human CD2/PE-Cy7
蛋白電泳伊紅黃色染色試劑盒	神經(jīng)調(diào)節(jié)蛋白2抗體 NRG2
小鼠甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)elisa檢測試劑盒	視網(wǎng)膜前神經(jīng)折疊源框蛋白抗體 RAXL1
人層粘連蛋白β1(LN-β1)elisa檢測試劑盒	小鼠脂多糖/內(nèi)(LPS)elisa檢測試劑盒
PH9-10顯色（THYMOLPHTHALEIN）指示溶液	HGC-27+YFP人胃癌細(xì)胞黃色熒光標(biāo)記大鼠內(nèi)皮素轉(zhuǎn)換酶1(ECE1)elisa檢測試劑盒
大鼠白介素15(IL-15)elisa檢測試劑盒	人ADAM金屬肽酶含血小板反應(yīng)蛋白1基元4(ADAMTS4)elisa分析檢測試劑盒
小鼠腦鈉素/腦鈉尿肽(BNP)elisa檢測試劑盒免費代測	組織（PROTEASE）活性比色法定量檢測試劑盒

三、培養(yǎng)注意事項:

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 
2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。 
3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。 
4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，，用新鮮的完全培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。 
5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。 
6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 
7. 該細(xì)胞僅供科研使用。 
8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后次傳代建議 1：2 傳代 。 
9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。